[发明专利]稳定的重组腺苷脱氨酶

权利要求书

1.重组腺苷脱氨酶,其中以野生型腺苷脱氨酶表达的可氧化的氨基酸 残基被不可氧化的氨基酸残基代替,其中所述可氧化的氨基酸残基为74位 的半胱氨酸，所述不可氧化的氨基酸残基为丝氨酸。

2.权利要求1的重组腺苷脱氨酶，其为重组牛腺苷脱氨酶。

3.权利要求2的重组腺苷脱氨酶，其从根据SEQ ID NO:2的DNA分 子翻译。

4.权利要求2的重组腺苷脱氨酶，其包含SEQ ID NO:1或具有选自以 下的氨基酸取代的SEQ ID NO:1：Gln代替Lys₁₉₈;Ala代替Thr₂₄₅;Arg代替 Gly₃₅₁,及其组合。

5.聚环氧烷-腺苷脱氨酶缀合物,其中所述腺苷脱氨酶为权利要求1的 重组腺苷脱氨酶。

6.权利要求5的聚环氧烷-腺苷脱氨酶缀合物,其中所述聚环氧烷为聚 乙二醇。

7.权利要求6的聚环氧烷-腺苷脱氨酶缀合物,其中所述聚乙二醇通过 选自以下的连接基缀合至重组腺苷脱氨酶：琥珀酰亚胺基碳酸酯、噻唑烷硫 酮、尿烷和基于酰胺的连接基。

8.权利要求6的聚环氧烷-腺苷脱氨酶缀合物,其中所述聚乙二醇与重 组腺苷脱氨酶的Lys的ε氨基共价连接。

9.权利要求6的聚环氧烷-腺苷脱氨酶缀合物,其中所述重组腺苷脱氨 酶包含一个或多个聚乙二醇链，所述聚乙二醇链与重组腺苷脱氨酶的一个或 多个Lys残基的ε氨基连接。

10.权利要求6的聚环氧烷-腺苷脱氨酶缀合物,其中所述重组腺苷脱氨 酶包含约11至约18个聚乙二醇链，所述聚乙二醇链与重组腺苷脱氨酶的一 个或多个Lys残基的ε氨基连接。

11.权利要求6的聚环氧烷-腺苷脱氨酶缀合物,其中所述聚乙二醇通过 琥珀酰亚胺基碳酸酯连接基缀合至重组腺苷脱氨酶。

12.权利要求6的聚环氧烷-腺苷脱氨酶缀合物,其中所述聚乙二醇的分 子量为约2,000至约100,000。

13.权利要求6的聚环氧烷-腺苷脱氨酶缀合物,其中所述聚乙二醇的分 子量为约4,000至约45,000。

14.权利要求6的聚乙二醇-腺苷脱氨酶缀合物，其中每个聚乙二醇链重 约5,000道尔顿。

15.权利要求1-14中任一项的重组腺苷脱氨酶在制备用于在哺乳动物 中治疗腺苷脱氨酶-介导的病症的药物中的用途。

16.权利要求15的用途,其中所述腺苷脱氨酶-介导的病症为严重联合 免疫疾病。

17.纯化权利要求5的重组腺苷脱氨酶的方法,包括通过离子交换色谱 法纯化该蛋白质。

18.纯化包含SEQ ID NO:1的权利要求5的重组腺苷脱氨酶的方法,包 括通过疏水作用色谱法纯化蛋白质。

19.通过权利要求17的方法制备的重组腺苷脱氨酶。

20.通过权利要求18的方法制备的重组腺苷脱氨酶。

21.分离的DNA，其编码具有氨基酸序列SEQ ID NO:1或具有选自以 下的氨基酸取代的SEQ ID NO:1的重组腺苷脱氨酶：

Gln代替Lys₁₉₈;Ala代替Thr₂₄₅;Arg代替Gly₃₅₁,及其组合。