[发明专利]测量凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制的方法

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求在2007年5月3日提交的美国序列号第60/915,820号的权益，其在此全部引入作为参考。

技术领域

本发明涉及诊断测定法(diagnostic assay)领域，具体而言涉及测定血液样品中血小板功能活性以研究抗血小板组合物的效果，以及更具体而言涉及血小板激活剂(例如凝血酶受体激活肽(TRAP))用于测量灵敏度提高的凝血酶受体抑制剂(包括E5555(Eisai)和SCH 530348(Schering-Plough))的血小板功能的用途。

背景技术

血小板在哺乳动物生理学中起的作用非常多样化，但是其主要作用是促进止血。在许多情况下，希望评价血液凝固的能力，其是常常由血小板粘附和/或聚集的能力控制的参数。因此，令人感兴趣的是对血小板粘附功能的评估。例如，令人感兴趣的问题包括施用药物是否能阻断或促进血块形成，或者是否在手术操作前检测血小板功能的不足。令人感兴趣的还有评估作为正在测试的新药或者被批准正在患者中用于临床治疗的血小板抑制剂的功效。

已知血小板在多种条件下和多种不同的反应物存在下聚集。血小板聚集是用来描述血小板彼此结合的术语。体外的血小板凝集依赖于血小板在受到聚集诱导剂(如凝血酶、二磷酸腺苷(ADP)或胶原)激活后将纤维蛋白原结合到血小板表面的能力。

血小板在维持正常止血中起着关键的作用。当暴露于损伤的血管时，血小板将粘附在暴露的内皮下基质上。最初的粘附之后，在损伤的部位释放或产生的各种因子(如凝血酶、ADP或胶原)激活血小板。一旦血小板被激活，血小板糖蛋白GPIIb/IIIa受体发生构象改变，使得其结合纤维蛋白原和/或冯维勒布兰德因子(von Willebrand factor)。正是这种在邻近的血小板上通过GPIIb/IIIa受体结合多价纤维蛋白原和/或冯维勒布兰德因子分子导致额外的血小板补充到损伤部位并聚集形成止血栓子或血栓。

体外的血小板聚集仪法(platelet aggregometry)是用来评估体内血小板形成导致初级止血栓子的聚集的能力的方法。在这种技术中，将聚集剂(例如ADP或胶原)加入到全血或富含血小板的血浆中，并监测血小板的聚集。血小板聚集仪法是可以帮助患者诊断和选择疗法的诊断手段。目前测量血小板聚集的测定法昂贵、耗时、繁琐，并且一般不适合临床环境。

已经开发出快速的测定血小板功能测定法并在美国专利第5,763,199号(Coller)中进行了描述，其在此全部引入作为参考。该测定法测定全血中的糖蛋白GPIIb/IIIa受体阻滞(receptor blockade)。当用GPIIb/IIIa配体例如纤维蛋白原包覆的小聚合物珠(small polymeric beads)与含有具有未被阻滞的、激活的GPIIb/IIIa受体的血小板接触时导致所述小聚合物珠的凝集。没有凝集说明GPIIb/IIIa受体没有激活和/或者GPIIb/IIIa受体被阻滞。在优选的实施方式中，凝血酶受体激活剂的加入导致产生足以在床边进行的快速和方便的测定法，并且如果所述GPIIb/IIIa受体未受阻滞，那么所述测定法致使小聚合物珠在方便的、已知的时间段内凝集。所述测定法包括将要测试的血液在不打开收集容器的情况下从收集容器转移至测定装置(assay device)的能力。这种血小板聚集测定法可以与激活凝血时间(ACT)同时进行，测量ACT是用来评估肝素化的充分程度。

血小板聚集在血栓形成和急性冠状动脉疾病中起关键作用。一种用于治疗血栓形成的方法涉及抑制凝血酶的酶活性，且用于这种目的的化合物包括了肝素、低分子量肝素、水蛭素、阿加曲班、水蛭肽等。所有的这些化合物抑制凝血酶的酶活性，并且通过在不特异性抑制凝血酶对细胞作用的情况下抑制纤维蛋白血块的形成而发挥作用。因而，流血倾向是临床上遇到的常见的副作用。