[发明专利]用于制备甲基丙二酰辅酶A或乙基丙二酰辅酶A的酶及其用途

权利要求书

1.分离的DNA，其选自下列序列：

a)根据SEQ ID NO：01的序列，

b)无内含子的序列，其衍生自根据a)的序列并且与根据SEQ ID NO：01的序列编码相同的蛋白质或肽，

c)编码包含根据SEQ ID NO：02的氨基酸序列的蛋白质或肽的序列，

d)与根据a)至c)的序列至少80％同一的序列，

e)与根据组a)至d)之一的序列的反义链杂交或者在考虑遗传密码简并性的情况下将能够与之杂交的序列，

f)根据组a)至e)之一的序列的衍生物，其通过一个或多个碱基的置换、添加、倒位和/或删除而获得，

g)在遗传密码简并性范围之内相应于SEQ ID NO：01的序列，

h)具有SEQ ID NO：01的中性有义突变的序列，以及

i)与根据组a)至h)之一的序列互补的序列。

2.载体，其包含权利要求1中所定义的根据组a)至h)之一的DNA序列。

3.根据权利要求2的载体用于转化细胞的用途。

4.经转化的细胞，其通过用根据权利要求2的载体进行转化而获得。

5.分离的多肽，其具有带有SEQ ID NO：02的氨基酸序列，或者当在SEQ ID NO：02中删除、插入、置换至多10个氨基酸或将至多10个氨基酸附加至带有SEQ ID NO：02的氨基酸序列的C-或N-末端时而获得的氨基酸序列。

6.细胞，所述细胞相对于其野生型而言如此地经基因工程改造，从而与其野生型相比较，它能够形成更多的3-羟基异丁酸或其衍生物。

7.根据权利要求6的细胞，其中所述细胞具有相比于其野生型而言增加的酶E₁的活性，所述酶E₁由权利要求1中所定义的根据组a)至h)之一的DNA序列编码。

8.根据权利要求6或7的细胞，其中所述细胞包含具有权利要求1中所定义的根据组a)至h)之一的DNA序列的外源DNA。

9.根据权利要求7或8的细胞，其中所述细胞具有相比于其野生型而言增加的酶E₁₁的活性，所述酶E₁₁由根据组A)至H)之一的DNA序列编码：

A)根据SEQ ID NO：03的序列，

B)无内含子的序列，其衍生自根据A)的序列并且与根据SEQ ID NO：03的序列编码相同的蛋白质或肽，

C)编码包含根据SEQ ID NO：04的氨基酸序列的蛋白质或肽的序列，

D)与根据组A)至C)之一，特别优选地根据组A)的序列至少80％同一的序列，

E)与根据组A)至D)之一，特别优选地根据组A)的序列的反义链杂交或者在考虑遗传密码简并性的情况下将能够与之杂交的序列，

F)根据组A)至D)之一，特别优选地根据组A)的序列的衍生物，其通过至少一个碱基的置换、添加、倒位和/或删除而获得，

G)在遗传密码简并性范围之内相应于SEQ ID NO：03的序列，或者

H)具有SEQ ID NO：03的中性有义突变的序列。

10.根据权利要求4和6-9中之一的细胞，其中所述细胞属于类球红细菌这一种类。

11.用于制备经基因工程改造的细胞的方法，其包括提高细胞中酶E₁的活性的步骤，所述酶E₁由权利要求1中所定义的根据组a)至h)之一的DNA序列编码，或者所述酶E₁具有带有SEQ ID NO：02的氨基酸序列，或与根据SEQ ID NO：02的氨基酸序列享有至少50％同一性的氨基酸序列。

12.根据权利要求11的方法，其中所述方法另外还包括提高细胞中酶E₁₁的活性的步骤，所述酶E₁₁由权利要求9中所定义的根据组A)至H)之一的DNA序列编码，或者所述酶E₁₁具有带有SEQ ID NO：04的氨基酸序列，或与根据SEQ ID NO：04的氨基酸序列具有至少50％同一性的氨基酸序列。

13.根据权利要求11或12的方法，其中所述细胞属于类球红细菌这一种类。