[发明专利]用于体细胞核移植的犬科出生率的提高方法

权利要求书

1、一种生产犬核移植胚胎的方法，包括下列步骤：

制备去核卵母细胞；制备核供体细胞；将核供体细胞微注射到去核 卵母细胞中然后将供体细胞与去核卵母细胞之间进行电融合；和活化融 合的卵母细胞，

制备核供体细胞的步骤包括，当培养来自犬组织的核供体细胞时在 选自下组的细胞循环同步化诱导物质的存在下培养核供体细胞，该组由 细胞周期蛋白B激酶抑制剂、放线菌酮，DMSO，丁内酯I，巴菲敌柯林， 秋水仙胺，含羞草碱，秋水仙素，Hoechst 33342所组成。

2、根据权利要求1的生产犬核移植胚胎的方法，其特征在于：细胞 循环同步化诱导物质是胞周期蛋白B激酶抑制剂。

3、根据权利要求1的生产犬核移植胚胎的方法，其特征在于：细胞 循环同步化诱导物质以5-30μM的浓度加入。

4、根据权利要求1的生产犬核移植胚胎的方法，其特征在于：所述 通过加入细胞周期同步化诱导物质进行的核供体培养进行18-72小时。

5、根据权利要求1的生产犬核移植胚胎的方法，其特征在于：核供 体细胞选自由卵丘细胞、上皮细胞、成纤维细胞、神经细胞、角化细胞、 造血细胞、黑素细胞、软骨细胞、红细胞、巨噬细胞、单核细胞、肌肉 细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞、胚胎干细胞和胚胎生殖细胞、胎儿细胞、 胎盘细胞和成体细胞所组成的组中。

6、根据权利要求5的生产犬核移植胚胎的方法，其特征在于：核供 体细胞是成纤维细胞或者卵丘细胞。

7、一种生产克隆犬的方法，包括下列步骤：

制备去核卵母细胞；制备核供体细胞；将核供体细胞微注射到去核 卵母细胞中然后将供体细胞与去核卵母细胞之间进行电融合，活化融合 的卵母细胞并将活化的卵母细胞移植到代孕母体的输卵管中，其中，制 备核供体细胞的步骤包括当培养来自犬组织的核供体细胞时在选自下组 的细胞循环同步化诱导物质的存在下培养核供体细胞，该组由细胞周期 蛋白B激酶抑制剂、放线菌酮，二甲基亚砜，丁内酯I，巴菲敌柯林，秋 水仙胺，含羞草碱，秋水仙素，Hoechst 33342所组成。

8、根据权利要求7的生产克隆犬的方法，其特征在于：细胞循环同 步化诱导物质是胞周期蛋白B激酶抑制剂。

9、根据权利要求7的生产克隆犬的方法，其特征在于：细胞循环同 步化诱导物质以5-30μM的浓度加入。

10、根据权利要求7的生产克隆犬的方法，其特征在于：所述通过 加入细胞周期同步化诱导物质进行的核供体培养进行18-72小时。

11、根据权利要求7的生产克隆犬的方法，其特征在于：核供体细 胞选自由卵丘细胞、上皮细胞、成纤维细胞、神经细胞、角化细胞、造 血细胞、黑素细胞、软骨细胞、红细胞、巨噬细胞、单核细胞、肌肉细 胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞、胚胎干细胞和胚胎生殖细胞、胎儿细胞、 胎盘细胞和成体细胞所组成的组中。

12、根据权利要求11的生产克隆犬的方法，其特征在于：核供体细 胞是成纤维细胞或者卵丘细胞。