[发明专利]蛋白质分析

权利要求书

1.用于确定在第一反应组分和第二反应组分的未反应混合物中第一反应组分或第二反应组分的活性或官能度的方法，其包括以下步骤：

(a) 可逆地抑制第一反应组分以产生具有失活的第一反应组分和第二反应组分的混合物；

(b) 当评估第一反应组分的活性时，往混合物中加入已知量的第二反应组分，或当评估第二反应组分的活性时，加入已知量的第一反应组分；

(c) 可逆地活化第一反应组分；

(d) 允许第一反应组分与最初存在于混合物中的第二反应组分和已知量的第二反应组分反应，或允许第一反应组分与最初存在于混合物中的第二反应组分和已知量的第一反应组分反应；以及

(e) 确定最初存在于混合物中的第一或第二反应组分的活性或官能度。

2.权利要求1的方法，其中第一反应组分是凝血酶并且第二反应组分是纤维蛋白原。

3.权利要求2的方法，其中凝血酶是重组体或从动物或人类来源得到，并且纤维蛋白原是重组体或从动物或人类来源得到。

4.权利要求2的方法，其中同时进行步骤(b)和(c)。

5.权利要求4的方法，其中所述混合物呈粉末形式，并且可逆抑制第一反应组分的步骤包括在具有8.5至11.5的 pH范围的抑制性的溶液或第一溶液中重构第一反应组分和第二反应组分的混合物。

6.权利要求5的方法，其中所述抑制性的溶液或第一溶液具有9.5至10.5的pH。

7.权利要求6的方法，其中所述抑制性的溶液或第一溶液具有约10的pH。

8.权利要求5的方法，其中所述抑制性的溶液或第一溶液包含选自碳酸盐、TRIS(三(羟甲基)氨基甲烷)碱、硼酸盐、甘氨酸、磷酸盐、甲胺、2-(环己基氨基) 乙磺酸(CHES)、3-(环己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)或3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸(CAPSO)中的至少一种组分的碱性溶液。

9.权利要求8的方法，其中已知量的第二反应组分在第二溶液中，所述第二溶液能够使具有失活的第一反应组分和第二反应组分的抑制性的溶液或第一溶液的pH降低至约6.0至小于8.5。

10.权利要求9的方法，其中已知量的第二反应组分在第二溶液中，所述第二溶液能够使具有失活的第一反应组分和第二反应组分的抑制性的溶液或第一溶液的pH降低至约7.0至小于8.5。

11.权利要求10的方法，其中已知量的第二反应组分在第二溶液中，所述第二溶液能够使具有失活的第一反应组分和第二反应组分的抑制性的溶液或第一溶液的pH降低至约7.5。

12.权利要求9的方法，其中能够降低抑制性的溶液或第一溶液pH 的第二溶液是选自TRIS-HCl、咪唑、4-(2-羟乙基) 哌嗪-1-乙磺酸(HEPES)、磷酸盐、巴比妥、4-吗啉基丙磺酸(MOPS)、3-吗啉代-2-羟基丙磺酸(MOPSO)、1,4-哌嗪二乙磺酸(PIPES)、N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)、柠檬酸盐或碳酸盐中的至少一种组分的溶液。

13.权利要求12的方法，其中能够降低抑制性的溶液或第一溶液pH 的第二溶液包含25mM至500mM的TRIS-HCl缓冲液。

14.权利要求13的方法，其中能够降低抑制性的溶液或第一溶液pH 的第二溶液包含100mM至150mM的TRIS-HCl缓冲液。

15.权利要求9的方法，其中在步骤(b)中将已知过量的第二反应组分加入到具有失活的第一反应组分和第二反应组分的抑制性的溶液或第一溶液中。

16.权利要求2的方法，其中步骤(b)包括将具有已知量的第二反应组分的第二溶液加入到具有失活的第一反应组分和第二反应组分的抑制性的溶液或第一溶液中，以形成具有8.5至11.5的pH范围的第三溶液。

17.权利要求16的方法，其中可逆地活化第一反应组分的步骤(c)包括将第三溶液的pH调节至约6.0至8.5。