[发明专利]环介导等温扩增检测人前列腺癌特异基因DD3PCA3试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种定性检测基因的试剂盒及检测方法，具体涉及一种定性检测人前列腺癌特异基因DD3^PCA3的试剂盒及检测方法。

背景技术

前列腺癌位(Pca)居西方国家男性癌症发病率的第二位，在我国及亚洲国家，前列腺癌的发病率近年也在明显增高，有统计说明，我国前列腺癌已居泌尿男生殖系统肿瘤的前三位，而且发病年龄也日趋年轻化，前列腺癌的早期治疗可能使患者获得治愈，所以早期诊断和治疗对愈后至关重要。

目前临床通过检测前列腺特异性抗原(PSA)，达到诊断前列腺癌的目的。但PSA为前列腺特异性抗原，而非前列腺癌特异性抗原，在前列腺增生症和前列腺炎等良性前列腺病变中亦可升高，且近来有研究发现PSA在前列腺以外的器官亦可能高表达，暴露出PSA在Pca诊断中的局限性。

因此，寻找更为敏感、特异的肿瘤标记物用于Pca的早期诊断和预后检测具十分重要的意义。

DD3^PCA3是前列腺癌的特异性基因，在前列腺癌组织中高度表达，正常前列腺组织或者前列腺增生中无表达或低表达，其他肿瘤组织及器官中均无表达。核酸扩增(PCR)为基础的分子生物学技术的迅速发展，为DD3^PCA3的检测提供了一种快速、灵敏的方法，但普通PCR假阳性太高，不适合临床使用。荧光定量PCR具有灵敏、准确的优点，但采用TaqMan探针法操作烦琐、费用较高。

环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)不需PCR经过的变性、复性、延伸三个阶段，可在等温条件下1小时内将目的序列扩增10⁹倍以上，因此不需特殊设备，检测时间更短、敏感性更高；同时4条的特异性引物识别靶基因的6个特定区域，特异性更高，因此在基因检测上明显优于PCR。

但在实际应用中，引物设计及实验条件优化比较烦琐，所以至今国内外尚未见有关LAMP检测前列腺癌特异基因DD3^PCA3的文献和专利报道。

发明内容

本发明目的是解决环介导等温扩增检测前列腺癌特异基因DD3^PCA3技术领域的难点，设计合适的引物和优化的测试条件，提供一种定性检测人前列腺癌特异基因DD3^PCA3的试剂盒及检测方法，解决了普通PCR假阳性太高和荧光定量PCR存在的费用高的问题。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种环介导等温扩增检测人前列腺癌特异基因DD3^PCA3的引物，其特征在于：由一对外引物和一对内引物组成，其序列分别如下所示：

外引物1具有序列表中SEQ ID NO.2所述的碱基序列，具体序列如下所示：AGTGACATGTTTTTGCACATT；

外引物2具有序列表中SEQ ID NO.3所述的碱基序列，具体序列如下所示：CATCCTTTAAGGAACACATCAA；

内引物1具有序列表中SEQ ID NO.4所述的碱基序列，具体序列如下所示：TCCCAGGGATCTCTGTGCTTCAGCCCCTTTAAATATCCAC；

内引物2具有序列表中SEQ ID NO.5所述的碱基序列，具体序列如下所示：CGCCATCTTGGGTCATCGATATGTCCTTCCCTCACAAG；

其中，所述的一对外引物与一对内引物的摩尔数之比为1：6～8。

设计的引物位于人DD3^PCA3基因外显子3和外显子4a中，具有序列表中SEQ ID NO.1所述的碱基序列，具体序列为：

AGTGACATGTTTTTGCACATTTCCAGCCCCTTTAAATATCCACACACACAGGAAGCACAAAAGGAAGCACAGAGATCCCTGGGAGAAATGCCCGGCCGCCATCTTGGGTCATCGATGAGCCTCGCCCTGTGCCTGGTCCCGCTTGTGAGGGAAGGACATTAGAAAATGAATTGATGTGTTCCTTAAAGGATG。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种人前列腺癌特异基因DD3^PCA3定性检测试剂盒，其特征在于：由一套引物、10倍环介导等温扩增反应缓冲液、DNA聚合酶、阳性对照、阴性对照、逆转录酶和显色剂组成；所述的一套引物是由一对外引物和一对内引物组成，其序列分别如下所示：

所述引物包括2条外引物和2条内引物，其序列分别如下：