[发明专利]一种检测玉米赤霉烯酮的ELISA测试盒及制备及检测方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为玉米赤霉烯酮的酶联免疫分析用测试盒 及制备及检测方法。

(二)背景技术

玉米赤霉烯酮(ZEN)可以由禾谷镰刀菌、黄色镰刀菌、粉红色镰刀菌、 串珠镰刀菌、三线镰刀菌、茄病镰刀菌、木贼镰刀菌、尖孢镰刀菌等多种镰刀 菌产生。在自然状态下这些镰刀菌主要侵染玉米，导致玉米的病毒和带毒。特 别是当玉米收获季节遇到阴雨天时更易遭到感染。除玉米外，小麦、大麦、燕 麦也可感染这些镰刀菌而带毒。ZEN是一种类雌性激素毒素，动物摄食后会产 生雌性激素亢进毒素性反应，玉米赤霉烯酮具有较强的生殖毒性和致畸作用， 可引起动物发生雌激素中毒症，主要症状有阴道和乳腺肿胀、子宫肿大、外翻、 导致动物不孕或流产，对家禽特别是猪、牛和羊的影响较大，给畜牧业带来经 济损失；玉米赤霉烯酮可直接通过污染的谷类等作物进入人和动物体内，也可 通过被污染的肉、奶等动物性食品进入人体，其引起人中毒的症状主要表现为 无力、头痛、头晕、呕吐、腹泻和中枢神经系统的紊乱。

我国修订的《粮食卫生标准》规定小麦、玉米中ZEN的限量为60μg/kg。 欧盟委员会规则856/2005号规定谷物食品和谷物中玉米赤霉烯酮的最大限量为 20～100μg/kg，于2006年7月1日生效。目前也有许多国家制定了玉米赤霉烯 酮的限量标准，奥地利规定小麦、裸麦、硬质小麦中不得超过60μg/kg，巴西、 法国、罗马尼亚、俄罗斯、乌拉圭等国也制定了相应的限量标准。因此，为了 保障人们的身体健康，必须要对食品中的ZEN进行监控。目前，ZEN的理化分 析技术主要有薄层色谱法、气液相色谱法、质谱和核磁共振等多种方法，由于 以上诸分析方法的样品前处理比较复杂、操作时需专门的技术人员、检测费用 昂贵，不利于推广应用。

(三)发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种检测玉米赤霉烯酮的ELISA测试盒，其 检测快速、灵敏、准确、可定量、操作简便、无需贵重仪器设备，且对样品纯 度要求不高，特异性强，简化了样品预处理和纯化过程，特别适用于大批量样 品的检测，为此本发明还提供了测试盒的制备及检测方法。

一种检测玉米赤霉烯酮的ELISA测试盒，其包括洗涤液、显色液A、显色 液B和终止液，其特征在于：其还包括包被板、玉米赤霉烯酮标准品、玉米赤 霉烯酮单抗冻干品和酶标记的羊抗鼠抗体冻干品。

一种检测玉米赤霉烯酮的ELISA测试盒的制备：其特征在于：其包括以下 步骤，包被板的制备、玉米赤霉烯酮标准品的制备、玉米赤霉烯酮单抗冻干品 的制备、酶标记的羊抗鼠抗体冻干品的制备。

其进一步特征在于：所述包被板包被固相抗原，其可采用96或48或24孔 微孔板，用10mmol/L～100mmol/L pH9～10 Na₂CO₃-NaHCO₃的缓冲液作 为包被液，将呕吐毒素-卵清蛋白(ZEN-OVA)稀释至0.1μg/mL～1.0μg/mL，96或 48或24孔微孔板各孔加100μl，2℃～8℃放置过夜，弃去包被液，洗涤2次～5 次，按加入含1％～5％牛血清白蛋白，pH7～8的磷酸盐缓冲液，2℃～8℃封闭过 夜，弃去封闭液，吹干，板条密封后置-20℃～-40℃冷冻保存；

所述玉米赤霉烯酮标准品从玉米赤霉烯酮纯品中稀释得到，稀释液为去离 子水，ZEN浓度为：0.001ng/mL～50ng/mL；