[发明专利]一种测定阿巴芬净含量和杂质的高效液相色谱方法

说明书

技术领域

本发明属分析化学领域，涉及阿巴芬净与其杂质的分离测定。具体涉及色谱柱和流动相 的优化条件，从而实现用高效液相色谱(HPLC)法测定阿巴芬净原料或其制剂中阿巴芬净的 含量和杂质，达到控制阿巴芬净原料药及其制剂质量的目的。

背景技术

阿巴芬净是氨基噻唑类抗真菌药物，它的适应症包括指(趾)甲真菌病、阴道念珠菌病、 外阴阴道炎(特别是在细菌卷入时)，各种皮肤细菌性皮炎和某些可能的痤疮。其结构式为：

化学名为N-[4-[2-(2，4-二甲基苯氧基)苯基]-2-噻唑基]-1，4，5，6-四氢-2-嘧啶胺。在合成 该化合物的过程中，起始原料2，4-二甲酚中含有少量的邻甲酚、对甲酚、2，6-二甲酚、3， 5-二甲酚，参与反应最终成为反应副产物(即通常药品质量控制中的杂质)，这些反应副产物 的性质与阿巴芬净极为相似，分离难度大，质量难以控制，可能会由于去除不完全而影响药 物的纯度和质量。阿巴芬净合成过程中由起始原料引入的反应副产物主要有四个，分别是 N-[4-[2-(2-甲基苯氧基)苯基]-2-噻唑基]-1，4，5，6-四氢-2-嘧啶胺(简称：杂质A)， N-[4-[2-(4-甲基苯氧基)苯基]-2-噻唑基]-1，4，5，6-四氢-2-嘧啶胺(简称：杂质B)， N-[4-[2-(2，6-二甲基苯氧基)苯基]-2-噻唑基]-1，4，5，6-四氢-2-嘧啶胺(简称：杂质C)， N-[4-[2-(3，5-二甲基苯氧基)苯基]-2-噻唑基]-1，4，5，6-四氢-2-嘧啶胺(简称：杂质D)； 反应过程中在强碱作用下醚键断裂生成少量N-[4-(2-羟基-苯基)-2-噻唑基]-1，4，5，6-四 氢-2-嘧啶胺(简称：杂质E)。它们的结构式分别为

杂质A                杂质B

杂质C                杂质D

杂质E

因此，实现阿巴芬净及反应副产物的有效分离在阿巴芬净的合成和制剂过程的质量控制 方面具有重要的现实意义。

在分析方法的研究过程中，曾试用Inertsil ODS-2、Inertsil ODS-3、ZORBAX SB-C18、 EclipseXDB-C18等色谱柱，选择了不同的缓冲溶液体系，但阿巴芬净的峰形很差(峰对称因 子均小于0.5)，且阿巴芬净与反应副产物(杂质C、杂质D)难以有效分离。经反复试验发 现，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(ZORBAX Extend C18或Crest Premium C18， 250mm×4.6mm，5μm)，采用乙腈-甲醇-二乙胺缓冲溶液(1％，V/V，磷酸调节pH至7.5) ＝50∶25∶25为流动相，可以将阿巴芬净及其杂质进行有效分离，从而可以准确控制阿巴芬净 原料药及制剂的质量。本发明的方法能简便、快速、准确地分析阿巴芬净的纯度和含量并能 有效的控制其杂质。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离测定阿巴芬净或其杂质的高效液相色谱方法，从而实现 对阿巴芬净原料药及制剂的质量控制。

本发明的一种测定阿巴芬净或其制剂中杂质和含量的高效液相色谱方法，包括将含阿巴 芬净的供试品溶液，注入到色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱的色谱仪中，进行分离检测阿 巴芬净的含量或其有关的杂质，其中，流动相为有机溶剂和缓冲溶液的混合物，检测器为紫 外检测器或质谱检测器。

在上述的流动相中，有机溶剂与缓冲溶液的体积比为60∶40～85∶15，优选80∶20～65∶ 35，最优选75∶25；其中，所述的有机溶剂为乙腈、甲醇或乙腈与甲醇的混合溶液，优选乙 腈与甲醇的混合溶液，其体积比为4∶1～1∶3，优选体积比为2∶1；所述的缓冲液由碱性物 质和酸性物质组成，其中：碱性物质为三乙胺、二乙胺或其混合物，优选二乙胺；酸性物质 为磷酸。所说的缓冲液，当碱性物质分别为三乙胺、二乙胺时，其缓冲液分别称为三乙胺缓 冲液和二乙胺缓冲液，其中，二乙胺缓冲液的浓度为0.1％～2％(V/V)，优选1％(V/V)，缓冲液 的pH值为6.0～9.0，优选pH值为7.0～8.0，更优选pH值为7.5。