[发明专利]一种橡胶树试管苗无菌根体细胞胚发生植株再生方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物组织培养方法，具体地说，涉及一种以橡胶 树试管苗无菌根作为外植体，通过体细胞胚发生途径获得再生植株的 方法。

背景技术

橡胶树是多年生的异花授粉乔木，栽培于热带地区。橡胶树的主 产品天然橡胶是重要的工业原料和战略物资，在国民经济中占有重要 地位。由于我国热带地区可种植橡胶树的土地资源有限，且天然橡胶 属于不可替代的稀缺资源。因此，选育和推广高产橡胶树，是提高单 位面积产量、确保我国天然橡胶总产量逐步提高的关键。

随着植物组织培养技术的发展，从上世纪七十年代以来，橡胶树 组织培养技术也蓬勃开展，以期利用生物技术拓宽橡胶树育种途径， 改良其性状，加速育种进程。目前橡胶树不同外植体来源的组织培养， 如花药、未授粉胚珠、子房、内珠被、子叶培养均获得成功，获得了 再生植株。但橡胶树根的组织培养还未见报道。

在其它植物中，从木本植物的根进行离体培养研究成功地诱导出 再生植株的报道较少。1990年Son等用银白杨试管苗的根系切取外植 体，经组织培养得到了再生植株。1991年法国的Pedrotti等进行了樱桃 的根系离体培养，通过间接愈伤组织诱导和直接芽诱导，成功地培养 出植株。1992年Bhat等切取酸柠檬的根在MS培养基中进行组织培养， 有低频的植株再生。1996年Sankhla等把合欢种子在无菌条件下诱导 萌发，取15～20天龄的幼苗的根作为外植体，经组织培养得到再生植 株。

在橡胶树栽培实践中，最早使用的种植材料是实生树，实生树来 自自然授粉的种子，具有生长快、经济寿命长、抗逆性强的优点，但 存在株间差异大、平均产量低(仅为芽接树的1/3)、不能保持母本优 良性状的缺点。

目前生产上普遍种植芽接树，使用的橡胶树繁殖的主要方法是嫁 接，即橡胶树种植材料主要是用芽接苗；芽接树减少了株间产量的差 异，大幅度提高了产量。但是砧木与接穗间存在相互作用，砧木对接 穗的影响不仅表现在生长、产量、生理生化特性及组织结构上，而且 还表现在内源植物激素方面，产量的变化与内源激素之间存在某种 联系。

近年来，发现一些具有优良性状的砧木，对芽接树的产量、抗寒、 速生等性状有重要影响。一般在我国大规模种植的高产橡胶树品种如 热研7-33-97，单株年产干胶6～7公斤。但目前在云南发现有些品种有 超高产的橡胶树，单株年产干胶100公斤以上，在西双版纳傣族自治 州景洪市也有单株年产干胶98公斤的橡胶树。橡胶树育种工作者取一 些超高产橡胶树的芽条与实生苗砧木进行嫁接后，并未发现嫁接苗长 大后在产量上出现超高产的情况。

从同一母本植株取芽条进行嫁接的芽接树，其接穗的遗传性状是 相同的；而作为砧木的实生苗，由种子萌发而来，在有性生殖过程中 发生了基因分离，因而实生苗砧木的遗传背景差别很大。芽接树成年 后，普通高产橡胶树之间产量差别小，但超高产橡胶树和普通高产橡 胶树之间产量差别则很大，相差几倍到十几倍，这与砧木的遗传性状 有关。

在科研和生产过程中，迫切需要对这些具有优良性质的砧木进行 扩大繁殖。但由于确定砧木具有优良品性要等到开割以后，需要7年 以上时间，此时在砧木上难以找到芽点或芽眼，优良砧木难以通过常 规育种方法扩大繁殖。

发明内容

本发明的目的是利用橡胶树优良品种的试管苗无菌根为外植体， 经体细胞胚发生途径获得再生植株，以建立优良砧木离体培养无性繁 殖体系、获得在遗传上整齐一致的砧木。

为了实现本发明目的，本发明所述的橡胶树试管苗无菌根体细 胞胚发生植株再生方法，包括如下步骤：

1)根的选择和处理：选取橡胶树花药培养经过胚状体发生途径 得到的试管苗的无菌幼根，切成长度约1.0～1.5cm的根段；

2)愈伤组织的诱导和继代培养：把根段接种于胚性愈伤组织诱 导培养基，暗培养25～40天；然后转入继代培养基，暗培养15～30 天，培养温度为25～28℃；

3)体细胞胚的诱导：将继代培养后的胚性愈伤组织转移到体细 胞胚诱导培养基，进行暗培养20～50天，培养温度为25～28℃，以 诱导出体细胞胚；

4)植株再生：再将成熟体细胞胚转移到出苗培养基，光照培养， 培养温度在25～28℃之间，培养20～50天，长成完整植株。