[发明专利]荧光定量型生物条形码检测方法及其应用

权利要求书

1、一种荧光定量型生物条形码检测方法，是在普通生物条形码检测方法的基础上， 用实时荧光定量PCR技术代替普通PCR检测和芯片检测对条形码DNA链进行定性、定 量检测的荧光定量型生物条形码检测方法。

2、根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述荧光定量型生物条形码 检测方法包括以下步骤：

1)NP探针的制备：用常规方法及金纳米颗粒、抗待测物的多克隆抗体、 上述互补探针NP链和条形码DNA链制备NP探针；

2)MMP探针的制备：用磁性微球和抗待测物的单克隆抗体制备MMP探针；

3)荧光定量型生物条形码检测：利用NP探针、MMP探针和待测物通过抗原、抗 体作用制备三明治复合物，然后在高温低盐条件下，释放条形码DNA链，最后对获得 的条形码DNA链进行实时荧光定量PCR检测。

3、根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述步骤1)中用柠檬酸三钠 还原法制备金纳米颗粒，金纳米颗粒的直径为20-40nm；用于荧光定量型生物条形码 检测的条形码DNA链具有序列表中SEQ ID No：1的核苷酸序列，互补探针NP链具有 序列表中SEQ ID No：2的核苷酸序列。

4、根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述步骤2)中磁性微球的直 径为0.5-1.5um。

5、根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述步骤3)中用于对条形码 DNA链进行实时荧光定量PCR检测的引物对的上游引物具有序列表中SEQ ID No：3的 核苷酸序列，下游引物具有序列表中SEQ ID No：4的核苷酸序列。

6、根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述步骤1)和步骤2)中还 包括对NP探针和MMP探针进行纯化的步骤。

7、根据权利要求1-6任一项所述的检测方法，其特征在于：所述荧光定量型生物 条形码检测方法对蓝舌病病毒、毒素、生物战剂、类固醇、脂类、维生素、肿瘤特异 性标志物均可进行检测。

8、根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述待测物为蓝舌病病毒时， 以蓝舌病病毒的VP7蛋白作为检测对象进行荧光定量型生物条形码检测。

9、根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于：所述检测方法中使用的MMP 探针包被有抗VP7蛋白的单克隆抗体，NP探针包被有抗VP7蛋白的多克隆抗体。

10、一种荧光定量型生物条形码检测试剂盒，包括包被有抗待测物单克隆抗体的 MMP探针，包被有抗待测物多克隆抗体的NP探针，以及用于实时荧光定量PCR检测的 引物对和条形码DNA链；所述与NP探针联结的条形码DNA链具有序列表中SEQ ID No： 1的核苷酸序列，互补探针NP链具有序列表中SEQ ID No：2的核苷酸序列；用于对 条形码DNA链进行实时荧光定量PCR检测的引物对的上游引物具有序列表中SEQ ID No：3的核苷酸序列，下游引物具有序列表中SEQ ID No：4的核苷酸序列。