[发明专利]尖吻蝮蛇蛇毒血凝酶

权利要求书

1、尖吻蝮蛇蛇毒血凝酶，其由α、β两个亚基构成，亚基链间由二硫键连接，其中α亚基具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列，β亚基具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。

2、如权利要求1所述的蛇毒血凝酶，其特征在于该酶是一种丝氨酸蛋白酶，能够水解人纤维蛋白原α链。

3、含有权利要求1或2所述蛇毒血凝酶的药物。

4、如权利要求3所述的药物，其为冻干粉。

5、权利要求1或2所述血凝酶的纯化方法，其包括如下步骤：

1)、蛇毒预处理；

2)、将预处理后的蛇毒溶液上经预平衡的DEAE-Sephrose FF层析柱，用0.01M pH7.4PBS洗柱，再用含0～1M NaCl的0.01M pH7.4PBS分步洗脱，收集0.06M NaCl溶液的洗脱液；

3)、将上述洗脱液适当浓缩后透析去除NaCl；

4)、将透析后的溶液再次上经预平衡的DEAE-Sephrose FF层析柱，用0.01M pH7.4PBS洗柱，再用含0～1M NaCl的0.01M pH7.4PBS分步洗脱，收集0.06M NaCl溶液洗脱液的最后洗脱峰；

5)、将上述洗脱液适当浓缩后透析去除NaCl。

6、如权利要求5所述的方法，其中，步骤1)蛇毒预处理的方法是将蛇毒用适量预冷的0.01M pH7.4PBS溶解，离心取上清液进行透析或超滤。

7、如权利要求6所述的方法，其特征在于其中步骤1)蛇毒预处理的方法是：称取蛇毒若干克，用蛇毒重量20倍体积预冷的0.01MpH7.4PBS于4-8℃的层析柜中搅拌溶解30分钟，于4℃、10000g离心10分钟，将离心上清液倾入透析袋中，离心沉淀用PBS搅拌悬浮，再次离心，合并两次离心上清液于透析袋中，在层析柜中对0.01MpH7.4PBS透析24小时，中间换液3次；或将蛇毒溶解后用分子截留量为5000D的超滤膜进行超滤。

8、如权利要求5所述的方法，其中，步骤2)和步骤4)采用0.01M pH7.4PBS预平衡DEAE-Sephrose FF层析柱，然后上样。

9、如权利要求5～8任一项所述的方法，其特征在于其中步骤2)和步骤4)在搅拌条件下向洗脱液中逐步添加粉末固体硫酸铵，使硫酸铵饱和度达到80％，4℃、10,000g离心10分钟，收集沉淀蛋白，沉淀蛋白用适量的0.01M pH7.4PBS溶解，装入一透析袋中，对0.01MpH7.4PBS进行透析，共透析24小时，期间换液三次；或采用分子截留量为5000D的超滤膜将洗脱液经反复稀释超滤除盐以浓缩蛋白。