[发明专利]腺病毒转染的初级细胞以及路径图谱绘制方法

权利要求书

1.一种确定刺激是否能够激活免疫细胞中的候选顺式作用调节元件 的方法，其中所述顺式作用调节元件受至少一种转录因子或增强子的调节， 且其中所述刺激已知能够调控信号传递路径的表达，所述方法包括步骤：

(a)用重组腺病毒转染所述免疫细胞，所述重组腺病毒含有有效地连 接于所述候选顺式作用调节元件的报告基因；

(b)测量报告基因活性的基底水平；

(c)对所述免疫细胞施加所述刺激；和

(d)测量响应所述刺激的报告基因的活性。

2.权利要求1的方法，其中所述刺激包括调控调节蛋白的表达，并且 所述施加步骤(c)包括调控所述调节蛋白的表达。

3.权利要求2的方法，还包括用所述调节蛋白的表达系统共转染所述 免疫细胞的步骤。

4.权利要求1的方法，其中所述施加步骤(c)包括引入候选调节化合 物。

5.权利要求1的方法，其中所述报告基因选自荧光素酶、绿色荧光 蛋白(“GFP”)、β-半乳糖激酶(“GAL”)、氯霉素乙酰转移酶(“CAT”)。

6.权利要求1的方法，其中所述报告基因为抑制基因。

7.权利要求6的方法，其中所述抑制基因为IκBsd。

8.权利要求1的方法，其中所述顺式作用调节元件受与炎症相关的 调节蛋白调控。

9.权利要求1的方法，其中所述顺式作用调节元件选自AP-1、CRE、 ISRE、NFAT、NFκB和SRE。

10.权利要求1的方法，其中所述免疫细胞选自巨噬细胞、CD4⁺T细 胞以及未成熟树突细胞。

11.一种抑制免疫细胞中信号传递路径表达的方法，包括步骤：

(a)用重组腺病毒转染所述免疫细胞，其中所述重组腺病毒含有有效 地连接于顺式作用调节元件的抑制基因，其中所述顺式作用调节元件属于 所述信号传递路径；和

(b)诱导所述抑制基因表达。

12.权利要求11的方法，其中所述信号传递路径为NFκB信号传递路 径。

13.权利要求11的方法，其中所述抑制基因为IκBsd。

14.权利要求11的方法，其中所述免疫细胞选自巨噬细胞、CD4⁺T 细胞和未成熟树突细胞。