[发明专利]苦参碱液相色谱测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种化学检测技术领域的方法，具体是一种苦参碱液相色谱 测定方法。

背景技术

高效液相色谱分析方法是药物分析中常用的方法，该法以经典液相色谱为基 础，引入气相色谱法的理论和技术，流动相采用高压输送，并使用高效固定相及 现代化色谱工作站，可实现在线分离和分析。具有适用范围广、分离效率高、分 析速度快、灵敏度高等特点。所以，近年来广泛应用于中草药及其制剂化学成分 分离、鉴定及含量测定。

苦参碱为豆科植物苦参、苦豆子和山豆根含有的主要生物碱之一，临床主要 用来治疗癌症，病毒性肝炎，心脏病，以及皮肤病牛皮癣和湿疹，还是一种天然 植物农药，值得关注开发。苦参碱现行纯度分析方法有薄层色谱法、毛细管电色 谱法、高效液相色谱法。其中高效液相法大多使用了离子对试剂或者强酸碱，或 者采用氨基柱、离子交换柱，洗脱方式也多为梯度洗脱，这些分析方法的不足之 处在于：①离子对试剂或强酸碱的引入容易产生沉淀，使高效液相色谱仪中高压 泵的柱塞和密封垫摩擦产生系统漏液，损害较大；②氨基柱、离子交换柱造价高、 寿命短、保养困难；③梯度洗脱法溶剂的配比随时间而变化，每次分离都需要重 新平衡，分析时间长、操作复杂、重现性不及等度洗脱；④流动相配制相当复杂， 不易操作。另外，由于苦参碱的最大吸收波长在210nm左右，而许多试剂在波 长210nm左右也有强烈吸收，容易对检测造成干扰，导致紫外检测器灵敏度降 低。

经过对现有技术的检索发现，中国专利申请号200610060119.3，公开号 CN101046467A，记载了一种“青柏洁身洗液中苦参碱含量的测定方法”，包括 下列步骤：称取苦参碱对照品适量，加甲醇配制成0.01～0.1mg/mL的溶液；制 备供试品溶液：精密量取本品5～20mL，加浓氨试液0.25～1mL，用氯仿振摇提 取3次以上，每次20mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加少量氯仿(约5mL)溶解， 装入碱性氧化铝柱(80～200目，1～5g)，氯仿-甲醇(2～10∶0～2)10～50ml洗脱， 收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液即得，分别精密吸取对照品溶液5～40μL，供 试品溶液5～40μL，注入液相色谱仪，测定，计算得出结果。但是该技术具有操 作复杂，成分分离度不佳及分析结果重现性不佳的不足。

又经过检索发现，侯惠婵在《中国新医药》(2004，Vol.3-No.9-P.83)上， 发表了《山豆根中氧化苦参碱和苦参碱的含量测定》，记载了一种以RP-HPLC法 同时测定山豆根中苦参碱和氧化苦参碱的含量的方法，但是该技术具有流动相配 制复杂，线性范围窄的不足。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述不足，提供一种苦参碱液相色谱测定方法， 操作步骤简单，适应性强，分析结果重现性好。

本发明是通过以下技术方案实现的，本发明包括以下步骤：

①取苦参碱样品10mg，用甲醇定容于容量瓶中，超声溶解得供试品溶液；

②取苦参碱对照品5mg，用甲醇定容于容量瓶中，超声溶解得苦参碱标准液；

所述的甲醇为色谱纯级甲醇。

③各取10μL的供试品溶液和苦参碱标准液注入液相色谱仪进行测定；

所述的液相色谱仪为包含有紫外检测器的高效液相色谱仪和十八烷基硅烷 键合硅胶色谱柱。

所述的液相色谱仪所采用的流动相为包含甲醇、磷酸和三乙胺的水溶液，其 中甲醇与磷酸和三乙胺的水溶液的体积比为1∶3，该流动相的流速为0.8～ 1.2mL/min，柱温为25～50℃。

所述的测定时采用的洗脱方式是等度洗脱；检测波长为210±2nm，进样量2～ 20μL下进行检测。

④记录峰面积，按外标法以峰面积y对苦参碱含量x计算回归方程，获得所 述的回归方程为：

y＝1.32×10⁶x-1.16×10⁵，

相关系数为0.9996，线性范围为0.32～1.92μg。

⑤根据上述步骤，依次对步骤①的苦参碱样品进行精密度测定、24小时稳 定性测定、重现性测定以及回收率测定。

所述的精密度测定是指：吸取苦参碱标准液6μL，按步骤③和步骤④将溶液 注入液相色谱仪进行峰面积测定共6次，然后计算该6次的平均峰面积及相对标 准偏差RSD。