[发明专利]添加促进剂提高灰绿霉素A产量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提高灰绿霉素A产量的方法，特别是通过单独添加或者混合添加促进剂实现灰绿霉素A产量提高的方法。属于代谢调控优化发酵过程技术领域。

背景技术

灰绿霉素A是中国海洋大学从海洋真菌灰绿曲霉(Aspergillus glaucus)HB1-19(保藏日期2006.3.20，中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCM 206022)中分离出来的一种具有自主知识产权的、结构全新的具有抗癌活性蒽酮内酯化合物，灰绿霉素A以9-蒽酮为母核，分子中C-10与C-4形成六元内酯环。经中科院上海药物所评价，其对人肺癌A549细胞、人白血病HL60细胞有较强的增殖抑制作用，其IC₅₀分别为0.13和0.28μM，有良好的医药价值和开发应用前景。目前尚未有通过促进剂提高该新型9-蒽酮内酯类化合物的报道。

然而在灰绿曲霉(Aspergillus glaucus)HB1-19进行发酵培养时，灰绿霉素A的产量比较低(＜15mg/L)，这就给进一步的动物体内外活性评价及药代药动等药理学研究带来困难，而通过规模化发酵及代谢调控研究提高灰绿霉素A的产量可以有效的解决该问题。本发明旨在通过添加促进剂来对该菌的代谢进行调控以实现灰绿霉素A产量的提高，为后续的大规模发酵以及将灰绿霉素A开发为新药奠定基础。

发明内容

本发明的所要解决的技术问题在于克服灰绿霉素A发酵产量低的缺陷，提供一种通过添加促进剂提高灰绿霉素A产量的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种通过添加促进剂提高灰绿霉素A产量的方法，其特征是利用海洋丝状真菌灰绿曲霉HB1-19 CCTCC M 206022为生产菌株，在发酵培养基中单独或混合添加辛伐他汀、邻苯二甲酸、柠檬酸或短链脂肪酸作为促进剂。

上述促进剂的添加的初始时间为30小时-60小时。

在发酵过程中添加的促进剂为辛伐他汀，初始添加时间为30小时，添加方式为每隔24小时添加一次0.05-0.2mM辛伐他汀，连续加2-4次，使其最终浓度达0.1-0.8mM。

在发酵过程中添加的促进剂为邻苯二甲酸，初始添加时间为30小时，添加方式为每隔24小时添加一次2-6mM邻苯二甲酸，连续加2-4次，使其最终浓度达4-24mM。

在发酵过程中添加的促进剂为柠檬酸，初始添加时间为30小时，添加方式为每隔24小时添加一次2-6mM柠檬酸，连续加2-4次，使其最终浓度达4-24mM。

在发酵过程中添加的促进剂为乙酸，初始添加时间为60小时，添加方式为每隔24小时添加一次1-3mM乙酸，连续加2-4次，使其最终浓度达2-12mM。

在发酵过程中添加的促进剂为丙二酸，初始添加时间为60小时，添加方式为每隔24小时添加一次1-3mM丙二酸，连续加2-4次，使其最终浓度达2-12mM。

在发酵过程中添加的促进剂为丙酸，初始添加时间为60小时，添加方式为每隔24小时添加一次2-6mM丙酸，连续加2-4次，使其最终浓度达4-24mM。

在发酵过程中添加的促进剂为乙酸与丙二酸，初始添加时间为48小时，添加方式为每隔24小时添加一次0.5-1.5mM乙酸与0.5-1.5mM丙二酸混合物，连续加2-4次，使其最终浓度分别为1-6mM。

在发酵过程中添加的促进剂为乙酸与丙酸，初始添加时间为48小时，添加方式为每隔24小时添加一次1-3mM乙酸与0.5-1.5mM丙酸混合物，连续加2-4次，使其最终浓度分别为2-12mM及1-6mM。

在发酵过程中添加的促进剂为乙酸、丙二酸和丙酸，初始添加时间为48小时，添加方式为每隔24小时添加一次1-3mM乙酸与0.5-1.5mM丙二酸和0.5-1.5mM丙酸混合物，连续加2-4次，使其最终浓度分别为2-12mM，1-6mM，1-6mM。

在发酵过程中添加的促进剂为乙酸与柠檬酸，初始添加时间为48小时，，开始在发酵培养基中每隔24小时添加一次1-3mM乙酸与2-6mM柠檬酸混合物，连续加2-4次，使其最终浓度分别为2-12mM与4-24mM。

在发酵过程中添加的促进剂为乙酸与辛伐他汀，初始添加时间为48小时，开始在发酵培养基中每隔24小时添加一次1-3mM乙酸与0.05-0.2mM辛伐他汀混合物，连续加2-4次，使其最终浓度分别为2-12mM与0.1-0.8mM。