[发明专利]一种在细胞表面展示外源蛋白的方法及产品

权利要求书

1.一种基因构建物，其特征在于，所述基因构建物从5’到3’依次包括以下 操作性相连的元件：

(a)葡萄糖淀粉酶信号肽编码序列；

(b)外源蛋白的编码序列；所述的外源蛋白是乙酰胆碱酯酶；和

(c)酵母α凝集素基因C端锚定信号的编码序列。

2.如权利要求1所述的基因构建物，其特征在于，

所述的葡萄糖淀粉酶信号肽编码序列是SEQ ID NO：1所示序列中第1-75 位的序列；

所述的乙酰胆碱酯酶编码序列是SEQ ID NO：1所示序列中第76-1824位的 序列；和

所述的酵母α凝集素基因C端锚定信号的编码序列是SEQ ID NO：1所示 序列中第1858-2817位的序列。

3.如权利要求1所述的基因构建物，其特征在于，在元件(b)和元件(c)之 间，包括一标签蛋白编码序列。

4.一种重组的表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求1-3任 一所述的基因构建物。

5.一种细胞，其特征在于，所述的细胞是酵母细胞，所述酵母细胞中含有 权利要求4所述的表达载体；或其基因组中整合有权利要求1-3任一所述的基 因构建物。

6.如权利要求5所述的细胞，其特征在于，所述的酵母细胞选自：酿酒酵 母或毕赤酵母。

7.一种在细胞表面展示表达外源蛋白的方法，其特征在于；所述的外源蛋 白是乙酰胆碱酯酶，所述方法包括：

(i)将权利要求1-3任一所述的基因构建物导入到酵母细胞中，获得重组细 胞；

(ii)培养(i)的重组细胞，从而在细胞表面展示表达外源蛋白。

8.一种检测待测样品中有机磷或氨基甲酸酯类农药的试剂盒，其特征在 于，所述试剂盒中包括：

权利要求5或6所述的细胞。

9.一种检测待测样品中有机磷或氨基甲酸酯类农药的方法，其特征在于， 所述方法包括：

(1)将权利要求5或6所述的细胞悬浮于与所述细胞相容性的介质中，形 成检测体系；

(2)在(1)的检测体系中加入待测样品，混合；和

(3)检测(2)的体系中乙酰胆碱酯酶的活性，从而确定待测样品中是否含 有有机磷或氨基甲酸酯类农药或其含量。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，包括：向步 骤(2)的检测体系中加入乙酰胆碱酯酶的底物，通过检测乙酰胆碱酯酶对底物 的水解情况确定待测样品中是否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药或其含量。