[发明专利]一种在细胞表面展示外源蛋白的方法及产品

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种在细胞表面展示外 源蛋白的方法及产品。

背景技术

随着生物工程技术的发展，具有某些功能活性的蛋白被越来越多地应用于 各领域。然而，蛋白作为有生物活性的物质，其本身极易于失活，稳定性差， 保存很困难，且难以回收利用。并且，尽管目前蛋白的大规模重组制备已经变 得可能，然而表达后的蛋白的分离和提纯还存在诸多的困难，纯化步骤复杂。 因此本领域人员致力于寻找提高蛋白的稳定性，简化蛋白的纯化，固定化蛋白 以及使得蛋白回收利用的方法。

此外，作为一种具体的例子，有机磷或氨基甲酸酯类杀虫剂是在农业生产 中常用的一类农药，因其具有种类多样、杀虫谱广、价格低廉等特点，在农业 生产上被广泛使用，为粮食丰产和农业发展提供保证。但由于农药的不合理使 用，许多食品中有机磷或氨基甲酸酯类农药残留超标，导致急性中毒事件时有 发生，严重威胁着人们的身体健康和农产品在国际市场的竞争力，目前已经引 起了各国政府和社会各界的广泛关注。目前常用的有机磷或氨基甲酸酯类农药 检测方法有免疫学检测方法和酶抑制法。传统的免疫学检测技术因其抗体特异 性，不能同时检测多种不同种类的农药，在实际应用中受到限制。而酶抑制法 主要利用了乙酰胆碱酯酶对有机磷或氨基甲酸酯类农药的敏感性，具有简便、 灵敏等优势，成为应用较为普遍的农药残留快速检测技术。乙酰胆碱酯酶能够 专一性的被有机磷或氨基甲酸酯类农药抑制，但游离形式的乙酰胆碱酯酶稳定 性差，极易失活，并且其来源有限，纯化过程复杂，这些都大大地限制了其在 生产实践中的应用。因此，本领域需要找到更为有效的获得和利用乙酰胆碱酯 酶的方法，特别是提供乙酰胆碱酯酶稳定性，简化乙酰胆碱酯酶纯化技术的方 法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基因构建物，所述的基因构建物在被导入适当 的细胞后可在细胞表面表达外源蛋白。

本发明的另一目的在于提供一种细胞，所述的细胞表面展示有外源蛋白。

在本发明的第一方面，提供一种基因构建物，所述基因构建物从5’到3’依 次包括以下操作性相连的元件：

(a)葡萄糖淀粉酶信号肽编码序列；

(b)外源蛋白的编码序列；和

(c)酵母α凝集素基因C端锚定信号的编码序列。

在另一优选例中，所述的外源蛋白选自(但不限于)：受体蛋白、配体蛋白、 酶蛋白或抗体蛋白等。

在另一优选例中，所述的外源蛋白是长度是20-1200aa；较佳的是 50-1000aa；更佳的是80-800aa，如约100aa，200aa，300aa，500aa，700aa。

在另一优选例中，所述的构建物中，外源蛋白是：乙酰胆碱酯酶。

在另一优选例中，所述的乙酰胆碱酯酶是不带信号肽和锚定信号的乙酰胆 碱酯酶。

在另一优选例中，所述的葡萄糖淀粉酶信号肽编码序列是SEQ ID NO：1 所示序列中第1-75位的序列；或

所述的乙酰胆碱酯酶编码序列是SEQ ID NO：1所示序列中第76-1824位的 序列；或

所述的酵母α凝集素基因C端锚定信号的编码序列是SEQ ID NO：1所示 序列中第1858-2817位的序列。

在另一优选例中，在元件(b)和元件(c)之间，包括一标签蛋白编码序列。

在另一优选例中，所述的标签蛋白是Flag蛋白。

在另一优选例中，所述的元件(a)、(b)和(c)之间包括或不包括连接肽编 码序列，所述的连接肽具有1-15aa；较佳地具有1-10aa；更佳地具有1-5aa。

在另一优选例中，所述的乙酰胆碱酯酶是黑腹果蝇乙酰胆碱酯酶。

在另一优选例中，所述的基因构建物具有SEQ ID NO：1所示的序列。

在本发明的二方面，提供一种重组的表达载体，所述表达载体含有所述的 基因构建物。

在另一优选例中，所述的表达载体的骨架质粒是pYES-DEST52。

在本发明的第三方面，提供一种细胞，所述的细胞是酵母细胞，所述细胞 中含有所述的表达载体；或其基因组中整合有所述的基因构建物。

在另一优选例中，所述的酵母细胞选自：酿酒酵母或毕赤酵母。