[发明专利]人尿中三聚氰胺和三聚氰酸的液质联用定量检测法

权利要求书

1.一种人尿中三聚氰胺和三聚氰酸的定量检测法，包括临床尿样采集、-80℃保 存和室温下解冻备用，其特征在于步骤为：

(1)样品预处理：

(1.1)测定人尿样中三聚氰胺：取100μl尿样，依次加入10μl 5μg/ml三聚氰 胺同位素内标工作液及20μl 1N NaOH溶液，涡旋10s，加入1ml乙酸乙酯，旋 涡振荡10min，18000rpm离心3min；吸取上层有机相，加入100μl含0.1％甲酸 的水溶液，旋涡振荡10min，18000rpm离心3min；吸取下层水相转移至300μl 塑料管进样分析，其中，三聚氰胺同位素内标为13C3、15N3-三聚氰胺或氘代三 聚氰胺；

(1.2)测定人尿样中三聚氰酸：取100μl尿样，依次加入10μl 5μg/ml三聚氰 酸同位素内标工作液及20μl含1％甲酸的水溶液，涡旋10s，加入1ml含5％异 丙醇的乙酸乙酯溶液，旋涡振荡10min，18000rpm离心3min；吸取上层有机相， 洁净空气37℃吹干，残渣加入100μL含70％甲醇的水溶液，旋涡振荡3min， 18000rpm离心3min，转移至300μl塑料管进样分析，其中，三聚氰酸同位素内 标为13C3、15N3-三聚氰酸；

(2)三聚氰胺和三聚氰酸分别进行液相色谱分离：

(2.1)流动相：由A和B组成，流速为0.2～0.5ml/min，其中A为含0.0001～ 0.1％甲酸水溶液，B为含0.0001～0.1％甲酸的甲醇或乙腈或甲醇和乙腈的混合 液；

(2.2)色谱柱：采用苯基、氟苯基、氰基、硅胶填料柱，色谱柱内径为1～5mm， 长度为50～250mm；

(2.3)洗脱方法：采用等度洗脱或梯度洗脱；

(3)串联质谱测定条件：

(3.1)三聚氰胺用电喷雾电离源，正离子多反应监测扫描模式，离子选择通道： 定量通道m/z 127/68和定性通道m/z 127/85，内标通道为13C3，15N3-三 聚氰胺m/z 133/72，离子通道范围为±1.0amu；

(3.2)三聚氰酸用电喷雾电离源，负离子多反应监测扫描模式，离子选择通道： 定量通道m/z 128/42和定性通道m/z 128/85，内标通道13C3，15N3-三聚 氰酸m/z 134/44，离子通道范围为±1.0amu；

(4)按内标法以峰面积或峰高法，分别计算尿中三聚氰胺和三聚氰酸含量。