[发明专利]一种灵芝细胞固定化方法

权利要求书

1.一种灵芝细胞固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)固定化细胞载体的制备：取人造海绵或丝瓜瓤，洗净，在121℃灭菌45～60min，保存备用；

(2)灵芝细胞斜面的培养：无菌条件下，将灵芝细胞接种到斜面培养基上，在25～28℃培养7～9天，形成种子菌；

(3)种子菌扩大培养：在无菌条件下，收集种子菌，接种到装无菌培养液250～350ml的500ml三角瓶中或装无菌培养液1100～1400ml的2000ml三角瓶中，在25～28℃下以100～130r/min摇瓶培养8～10天，形成菌液；

(4)用恒重法测定细胞干质量达到0.7～1.0mg/ml；

(5)按培养液体积与载体干质量的比例为8～10ml∶1～1.5mg，在无菌条件下向菌液中加入备用载体；

(6)以100～130r/min摇瓶培养8～12小时，细胞被固定；

其中，所述灵芝选用紫芝(Ganoderma Sinense)YTZ9k1 CGMCC No.0742。

2.如权利要求1所述的灵芝细胞固定化方法，其特征在于：所述海绵孔径为0.6～0.9mm，切成0.3cm³。

3.如权利要求1所述的灵芝细胞固定化方法，其特征在于：所述丝瓜瓤为成熟丝瓜去皮，晒干后得到的丝瓜海绵体。

4.如权利要求1所述的灵芝细胞固定化方法，其特征在于：所述灵芝细胞斜面的培养基为马铃薯培养基。 

5.如权利要求1所述的灵芝细胞固定化方法，其特征在于：所述灵芝细胞斜面的培养基为：马铃薯150～250g、琼脂18～22g、蛋白胨0.1～0.3g、葡萄糖15～25g、磷酸二氢钾0.2～0.4g、硫酸镁0.1～0.2g、维生素B₁0.06～0.1g，加水至1000ml，自然pH，灭菌。

6.如权利要求1所述的灵芝细胞固定化方法，其特征在于：所述种子菌的液体培养基为：黄豆30～60g、玉米8～12g、蔗糖8～12g、硫酸镁0.3～0.5g、蛋白胨3～5g、葡萄糖8～12g、磷酸二氢钾1.2～1.6g、氯化钙0.1～0.3g，先将黄豆和玉米匀浆后配料，加水定容至1000ml，自然pH，灭菌。