[发明专利]基于ISSR分子标记构建中国长豇豆遗传资源数据库的方法及其应用

权利要求书

1、基于ISSR分子标记构建中国长豇豆遗传资源数据库的方法，其包括以下步骤：

(1)收集中国长豇豆品种资源，田间形态鉴定品种种内单株间的一致性与典型性，放弃分离与不典型的材料，对一致性与典型性品种的单株提取DNA；

(2)利用高多态性的3个ISSR标记鉴定初选单株间DNA水平的一致性，最终决选构建指纹图谱的品种与单株；

(3)利用决选品种及单株对中国长豇豆品种进行ISSR分析，建立指纹图谱数据库。

2、如权利要求1所述基于ISSR分子标记构建中国长豇豆遗传资源数据库的方法，其特征在于田间形态鉴定品种种内单株间的一致性与典型性的方法是：田间鉴定选用的性状指标包括：叶型、叶色、花形、花色、开花期、荚长、鲜荚重、粒重；每一品种选10个单株检测上述指标，利用方差同质性测验检测群体稳定性是否比对照品种早翠的性状指标差a＝5％，如果有两个指标都显示品种内单株间变异大于品种早翠的指标，则表示该品种不稳定，否则即为稳定的品种。

3、如权利要求1所述基于ISSR分子标记构建中国长豇豆遗传资源数据库的方法，其特征在于所述高多态性的3个ISSR标记是编号为834，825和858的ISSR引物。

4、如权利要求1或3所述基于ISSR分子标记构建中国长豇豆遗传资源数据库的方法，其特征在于对于田间形态鉴定品种具有一致性与典型性的品种任意选出3个单株，利用编号为834，825和858的3个高多态性ISSR引物对这3个单株利用ISSR标记进行遗传一致性的鉴定，每次实验重复3次，每一引物在每一品种中扩增出来的带型必须是一致的。

5、如权利要求1所述基于ISSR分子标记构建中国长豇豆遗传资源数据库的方法，其特征在于利用决选品种及单株对中国长豇豆品种进行ISSR分析，建立指纹图谱数据库的方法是：对决选长豇豆品种利用室内发芽，提取DNA，利用24对ISSR引物对它们进行PCR扩增，共扩增出192个位点，再采用“0-1”系统计带，将有带的赋值为1，无带的赋值为0；读取每个材料在不同引物扩增产物电泳谱带的数据，构建每一品种的指纹图谱数据库；所述24对ISSR引物碱基组成及其编号是：

6、如权利要求5所述基于ISSR分子标记构建中国长豇豆遗传资源数据库的方法，其特征在于决选品种为67个长豇豆品种是：

7、如权利要求5或6所述基于ISSR分子标记构建中国长豇豆遗传资源数据库的方法，其特征在于对67个中国长豇豆遗传资源进行ISSR电泳图谱分析。

8、一种基于ISSR分子标记构建中国长豇豆遗传资源数据库的用途，它是将该数据库用于中国长豇豆品种资源鉴定、评价、保存或育种中的一种或一种以上。