[发明专利]用于微粒的光学检测方法和光学检测装置

说明书

相关申请的交叉参考

本发明包含于2007年10月26日向日本专利局提交的日本专 利申请JP2007-278907所涉及的主题，其全部内容结合于此作为参 考。

技术领域

本发明涉及一种光学检测方法和光学检测装置，用于单个地识 别诸如细胞或者微珠的微粒。具体地说，本发明涉及一种光学检测 方法和光学检测装置，其中，当特定波长的激光束照射到微粒上时， 根据微粒所产生的荧光或散射光来识别微粒的类型。

背景技术

通常，当想要识别诸如细胞、微生物或者核糖体的涉及活体的 小颗粒时，例如，如在Hiromitsu NAKAUCHI，“Cellular Engineering Separate Volume，Experiment Protocol Series，Master Flow cytometry”， Shujunsha Co.Ltd.，第二版，2006年8月31日(在下文中称为专 利文献1)中所披露的，使用了利用流式细胞计量术或者流式细胞 计数器的光学检测方法。流式细胞计量术是这样一种方法：将特定 波长的激光束照射到在流道中被连续输送的一行微粒的一个上并 检测该微粒产生的荧光或者散射光来逐个区分多个微粒。

具体地说，在流式细胞中，层流是由包括检测对象的微粒的样 品液体和在样品液体周围流动的鞘液(sheath liquid)构成的。此外， 在样品液体和鞘液之间施加非常小的压力差将包括在样品液体中 的多个微粒排列成行。如果，在这种状态下，将激光束照射到流式 细胞上，那么微粒将逐个地穿过激光束。这时，利用电子光学检测 器来检测由激光束所激发并且由每个微粒所产生的荧光和/或散射 光。

然后，将所检测到的光转换为电子信号和数值以执行统计分 析，由此确定每个微粒的类型、大小、结构等。需要注意的是，如 果检测对象的每个微粒用多种荧光染料来修饰，那么即使使用滤光 片将所检测到的光分离为单独的波长带，来自非目标荧光染料的荧 光染料的荧光有时也漏入不同于目标荧光染料的检测器的检测器 中。因此，在现有技术的检测方法中，为了仅获得来自对象荧光的 数据，通常执行减去荧光的叠加的荧光校正。

此外，由于利用流式细胞计量术能够单个地识别微粒的类型、 大小、结构等并且能够同时分析多个参数，所以即使在样品液体包 括多种微粒的情况下，也可以仅快速并且确定地分配所需的微粒。

同样，在过去已经提出了为了能够检测用多种荧光染料修饰的 微粒所产生的多个荧光，引导具有彼此不同的波长的激光束沿着相 同的入射光路从而照射到微粒上的流式细胞计量器。这种类型的流 式细胞计量器在日本专利公开第2007-046947号(在下文中称为专 利文献1)中被披露。图12是示意性地示出了在专利文献1中披露 的流式细胞计量器的构造。参照图12，流式细胞计量器101包括： 流式系统102，用于将用荧光染料修饰的细胞在流式细胞中排成一 列；以及光学系统103，用于将具有彼此不同的波长的多个激光束 照射到细胞上从而检测诸如散射光和荧光的检测对象光。流式细胞 计量器101还包括信号处理装置104，用于控制和处理与从光学检 测系统103输出的散射光和荧光相关的电子信号。

在现有技术的流式细胞计量器101中，从光源106a、106b和 106c以彼此不同的相位，在预定周期内照射具有彼此不同的波长的 多个激光束。通过导光构件107将激光束导入相同的入射光路并会 聚到细胞105上。因此，即使在多个激光束照射在用多种荧光染料 标记的细胞上，也可以使用一个入射光路。因此，可以不设定延迟 时间而检测从细胞发射的多个荧光。

此外，还已披露了这样一种方法，其中，为了分配可用于再生 医学、移植等的活细胞，目标对象细胞被分离并进行分配而不必执 行荧光标记(其中，使用诸如结合了荧光染料的抗体的探针)。本 方法披露于日本专利公开第2003-304867号(在下文中称为专利文 献2)中。在专利文献2所披露的方法中，检测从细胞发射的向前 散射光和向后散射光，并且细胞的检测值作为位置信息显示在二维 屏幕上，从而识别细胞的大小和结构。

发明内容

但是，在上述现有技术中的检测方法和检测装置具有下列问 题。具体地说，现有技术检测方法的第一个问题是，如果利用微粒 产生的荧光或散射光的强度发生分配，那么上述荧光校正和基于荧 光校正结果所执行的数据分析的精度将降低。