[发明专利]检测PPN/MG61表达的方法及其应用

说明书

本申请是申请日为2004年8月19日，申请号为200410070085.7， 发明名称为“检测PPN/MG61表达的方法及其应用”的发明专利申 请的分案申请。

发明领域

本发明提供了一种用于在人类细胞中对PPN/MG61的表达和活性 水平进行测量的方法，通过抑制酶活性而治疗癌症的方法，以及这些 方法的应用。更具体地说，本发明提供了一种用于对正常细胞和癌症 细胞中的PPN/MG61的表达和活性水平进行对比测量的方法，通过抑 制酶活性而治疗癌症的方法以及这些方法的应用。

发明背景

Wnt(wingless and int homologue)是一个富含半胱氨酸的分泌糖 蛋白家族，该家族已在多种脊椎动物和无脊椎动物中被鉴定。它们已 被证明对于细胞命运的确定以及发育和癌症中多个阶段的细胞行为起 着重要的作用。它们与细胞表面的一个特异的受体家族(Frizzled(Fz) 家族)进行结合，并且激活信号通路以施加其效应，例如，作用于基 因转录(Cadigan KM和Nusse R，1997；Polakis P，2000)。Wnt家族的 特征之一为在该蛋白质分子的保守位点存在23或者24个半胱氨酸残 基。据设想这些半胱氨酸残基可通过二硫键的形成对Wnt蛋白的折叠 起着关键性作用。

使用经加工处理而表达多种Wnt的培养细胞对Wnt蛋白的加工和 分泌进行了研究(Smolich BD，et al，1993；Burrus LW和McMahon AP， 1995)。在多数细胞类型中Wnt的加工效率很低，这是因为存在着多 种加工中间体。因此Wnt并未很好地分泌到细胞之外。大多数Wnt 蛋白同一种HSP70蛋白—BiP—相结合并且留在ER中(Kitajewski J，et al，1992)。通过果蝇缺陷试剂盒对参与Wg(果蝇同源物)信号传导 的基因的筛选还鉴定了一种新的基因，其产物为Wg的加工和分泌所 需(Muller H，et al，1999)。这些结果提示，Wnt的加工和分泌是复杂 的，并且有多种特异性因子参与这些事件。

果蝇体节极性基因之一porcupine(porc)编码了一种多跨膜ER 蛋白，该蛋白为Wg在胚中的的正常分布所需(Kadowaki T，et al， 1996)。在porc突变体胚中，Wg被隔离于其合成细胞内并且不分布 于周边细胞中。Wg信号组件在多细胞生物体内相当保守，并且porc 类似物同样在其它物种中存在。线虫porc类似物mom-1在产Mom-2 细胞中是必需的，因为Porc为Wg合成细胞所需(Thorpe CJ，et al， 1997)。脊椎动物(小鼠和爪蟾)的porc类似物已在培养的细胞中被 证明可修饰Wg以及小鼠Wnt蛋白的N-糖基化(Tanaka K，et al，2000)。

果蝇基因Porcupine(Porc)的人类类似物近来也已被克隆 (Caricasole A，et al，2002)。人类Porcupine基因座(PPN/MG61) 横跨15个内含子，在Xp11.23的基因组序列中约12kb。与其小鼠和 爪蟾类似物相近，PPN/MG61以组织特异性方式表达。证据还显示， 在T-细胞因子应答报告者分析中(T-cell factor-responsive reporter assay)人类PPN/MG61可影响人类Wnt7A表达构建体的活性。这些 结果证明porc基因家族编码了进化上保守的ER膜蛋白，该蛋白参与 了Wnt家族的加工。

根据Porc和其它膜结合的酰基转移酶超家族之间的氨基酸序列保 守性，Porc有可能作为Wnt的酰基转移酶发挥功能(Hofmann K， 2000)。Porc对Wnt蛋白进行酰化并且将它们锚定于ER膜之上以刺 激他们的转录后N-糖基化，该过程对于分泌是必需的。在缺乏porc 的情况下，Wnt蛋白并不从合成细胞中分泌，并且因此Wnt信号传导 不在周边细胞中激活。