[发明专利]从植物源食用油中提取用于转基因成分检测的DNA的方法无效
| 申请号: | 200810167544.1 | 申请日: | 2008-10-10 |
| 公开(公告)号: | CN101358189A | 公开(公告)日: | 2009-02-04 |
| 发明(设计)人: | 柯海燕 | 申请(专利权)人: | 天根生化科技(北京)有限公司 |
| 主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12Q1/68 |
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| 地址: | 100083北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 植物 食用油 提取 用于 转基因 成分 检测 dna 方法 | ||
1.从以植物为原料的食用油中提取用以转基因成分检测的DNA的方法,由下述步骤组成:
(1)样品预处理:取食用油30ml,加入等体积乳化剂,于磁力搅拌器上搅拌2-3小时;其中,乳化剂为正己烷;
(2)取经预处理后的溶液10ml于大离心管,加5ml提取缓冲液,涡旋振荡1分钟后,室温静置10分钟;其中,提取缓冲液组成为:100mM pH8.0的Tris.HCl、20mM EDTA、500mM NaCl、1.5%SDS和4%PVP;
(3)加入2ml乙酸钠缓冲液,充分混匀,涡旋振荡1分钟后,室温静置10分钟;其中,乙酸钠缓冲液组成为:3M乙酸钠和11.5%冰乙酸;
(4)10,000rpm离心10分钟,将下层水相转移至新的大离心管中;
(5)向水相溶液中加入10μl Carrier RNA和0.7倍体积的异丙醇,充分混匀,10,000rpm离心10分钟,弃上清,保留沉淀;
(6)向大离心管中加入700μl超纯水,涡旋振荡15秒,加入700μl异丙醇,涡旋振荡15秒,简短离心,将溶液转移到新的小离心管中;
(7)12,000rpm离心5分钟,弃上清;
(8)加入700μl 70%乙醇,涡旋振荡5秒,12,000rpm离心5分钟,弃上清;
(9)开盖倒置,室温放置10min,彻底晾干残余的乙醇;
(10)加入40μl洗脱缓冲液TE,旋涡振荡1分钟,最终得到食用油DNA溶液。
2.根据权利要求1所述的从以植物为原料的食用油中提取用以转基因成分检测的DNA的方法,其特征在于:所述步骤(6)将溶液从50ml大离心管转移到1.5ml小离心管中。
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