[发明专利]一种采用全孢子接种工艺生产阿维菌素的方法

权利要求书

1.一种采用全孢子接种工艺生产阿维菌素的方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

(1)将阿维链霉菌接种至斜面培养基，在温度27-29℃下，培养7-9天；

(2)取上述的阿维链霉菌孢子斜面，用无菌水振荡洗涤斜面制备成孢子悬浮液；

(3)计算孢子悬浮液中孢子的数量，然后用移液管吸取孢子悬浮液至种子培养摇瓶中的种子培养基中，使每毫升种子培养基的孢子接种量为4×10⁷-6×10⁷个，种子培养摇瓶装量为30-50m1种子培养基/250ml摇瓶；

(4)将步骤(3)的孢子悬浮液进行摇床培养，在温度27-29℃下，转速为200-300r/mim的旋转式摇床上培养40-48小时，得到全孢子液；

(5)取上述的全孢子液，按培养基体积3％-7％的接种量，接种到发酵培养基中，进行摇床培养，发酵摇瓶装量为20-40ml发酵培养基/250ml摇瓶，在温度27-29℃下和湿度40％-50％下，转速为200-300r/mim的旋转式摇床上培养240-260小时，得到含有阿维菌素的发酵液；

上述的斜面培养基组分重量百分比为：酵母膏0.1％、麦芽糖0.1％、胰蛋白胨0.2％、葡萄糖0.4％、琼脂粉2％和蒸馏水余量，并使pH值调至7.2；

上述的种子培养基含有：玉米淀粉30g/L、玉米浆5g/L、酵母膏15g/L、KH₂PO₄4g/L和MgSO₄·7H₂O 0.2g/L，并调PH为7.0-7.2；

上述的发酵培养基含有：玉米淀粉120g/L、酵母粉15g/L、豆粕粉5g/L、花生饼粉5g/L和KH₂PO₄0.5g/L，并调PH为7.0-7.2。

2.如权利要求1所述的一种采用全孢子接种工艺生产阿维菌素的方法，其特征在于步骤(3)中用采用血球记数板计算孢子悬浮液中孢子的数量，每毫升种子培养基的孢子接种量为4×10⁷-5×10⁷个，种子培养摇瓶装量为30-40ml种子培养基/250ml摇瓶。

3.如权利要求1所述的一种采用全孢子接种工艺生产阿维菌素的方法，其特征在于步骤(3)中每毫升种子培养基的孢子接种量为5×10⁷-6×10⁷个，种子培养摇瓶装量为40-50ml种子培养基/250ml摇瓶。

4.如权利要求1所述的一种采用全孢子接种工艺生产阿维菌素的方法，其特征在于步骤(4)中摇床培养条件为：温度为27-28℃，摇床转速为230-270r/mim，培养时间为42-46小时。

5.如权利要求1所述的一种采用全孢子接种工艺生产阿维菌素的方法，其特征在于步骤(4)中摇床培养条件为：温度为28-29℃，摇床转速为240-260r/mim，培养时间为43-45小时。

6.如权利要求1所述的一种采用全孢子接种工艺生产阿维菌素的方法，其特征在于步骤(5)中摇床培养条件为：种子摇瓶装量为25-35ml发酵培养基/250ml摇瓶，接种量为3-5％，温度为27-28℃，摇床转速为230-270r/mim，培养时间为245-255小时。

7.如权利要求1所述的一种采用全孢子接种工艺生产阿维菌素的方法，其特征在于步骤(5)中摇床培养条件为：种子摇瓶装量为28-32ml发酵培养基/250ml摇瓶，接种量为5-7％，温度为28-29℃，摇床转速为240-260r/mim，培养时间为247-253小时。