[发明专利]牙鲆弹状病毒的快速检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种牙鲆弹状病毒的快速检测试剂盒，其特征在于试剂盒中包括试剂A-F：

试剂A：BstDNA聚合酶，8U/μL；

试剂B：逆转录酶，200U/μL；

试剂C：反应缓冲液，其中含有200mmol/LpH8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、80mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X-100；

试剂D：环介导等温扩增混合液，其中含有4.0μL2.5mmol/LdNTP、2.0μL 10mol/L甜菜碱、0.5μL200U/μL RNA酶抑制剂和4-5μL分子生物学级超纯水；

试剂E：引物混合液，其中含有2μL 20μmol/L正向内引物、2μL 20μmol/L反向内引物、1μL 5μmol/L正向外引物、1μL 5μmol/L反向外引物、1μL 20μmol/L正向环引物、1μL 20μmol/L反向环引物；其中引物序列分别如下：

正向内引物：5′-TTGGCCCCCAAAGAACCCTGTTTTGGGGAATACGTCCACAAG-3′；

反向内引物：5′-GAGATGAAACTGGCCCCCAGGTTTTAGTACAGTGCTGAGGCTGT-3′；

正向外引物：5′-GGGAACAATCTTGGGGACAT-3′；

反向外引物：5′-CATTGGCACCTTGGAGCT-3′；

正向环引物：5′-AACATGTGGTTCGGTAAAGGAC-3′；

反向环引物：5′-GTGGGAGTGTATGACACCACG-3′。

试剂F：荧光显色剂，成分为100×的荧光染料SYBR GREEN I。