[发明专利]一种纳米金和λDNA链连接的自组装材料的制备方法

权利要求书

1.一种纳米金和λDNA链连接的自组装材料的制备方法，其特征是步骤为：(1)胶体金的制备；(2)胶体金与上下游引物的偶联；(3)利用所制得的连金引物进行PCR，PCR产物进行琼脂糖电泳和TEM电镜扫描证明得到预期产物；

(1)胶体金的制备：利用Frens法制备15nm的胶体金；

所用的玻璃仪器都强酸浸泡，双蒸水清洗，烘箱烘干备用；制备时，向洁净的三角烧瓶中加入100mL质量浓度为0.01％的氯金酸和洁净的搅拌子搅拌，加热至沸腾，保持5～6分钟，紧接着一次性加入质量浓度为1％的柠檬酸三钠溶液4mL，边加热边搅拌，溶液颜色从淡黄色依次变成浅蓝黑色，至深蓝黑色，最后变成酒红色，当颜色不再变化后再继续加热15分钟使反应充分完全；最后，在搅拌的条件下，溶液冷却至室温，定容到100mL，4℃保藏；

(2)胶体金与上、下游引物的偶联：将所制备的胶体金与引物F、R分别进行连接，得金纳米粒子-引物复合物，即AuNP-F及AuNP-R，处理后备用；

所用上、下游引物为：

297bp-F：5’-GCAGTTGCCGTTTATCTCACC-3’，

297bp-R：5’-GGCATAGCGTCCTCACATTTC-3’，

将所制得的胶体金于11500rpm离心15min，弃上清，用灭菌水恢复至原体积的1/10，将上、下游引物浓度稀释至10um，以胶体金∶上下游引物R或F体积比1∶1的比例分别混合，超声10s，使之混合均匀，室温静置12h，向其中加入1M的NaCl，使体系中的NaCl浓度达到0.05M，继续室温静置12h，反应完毕，先用6500rpm离心15min，弃上清，然后加含0.1mol/L NaCl pH 7.0的磷酸盐缓冲溶液离心清洗，重复清洗多次除去未连接在金纳米粒子界面上的引物，最后用灭菌水定容至胶体金的体积待用，将引物连接在金纳米粒子表面，构成金纳米粒子-引物复合物，即AuNP-F及AuNP-R，4℃保藏备用；

(3)PCR：以λDNA为模板，采用制得的引物AuNP-F及AuNP-R进行PCR；

PCR反应体系：dNTPs 1μL，0.5个单位的Taq DNA聚合酶，λDNA模板质粒0.5μL，反应缓冲液5μL，取AuNP-F 3μL和AuNP-R 3μL，加灭菌水至总体积为50μL；

扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，40个循环；72℃再延伸3min；10℃保存，得PCR产物；

(4)琼脂糖电泳：

取5μL PCR产物，用3％琼脂糖凝胶电泳进行分析，采用前染，即在溶胶前期加入溴化乙啶，浓度为0.5μg/mL，电压U＝120V，时间T＝30min，进行电泳；

(5)TEM电镜扫描。