[发明专利]一种快速诊断唐氏综合征的方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及生物医药技术领域，特别是一种扩增21号染色体上D21S1440、D21S11和Penta D 3个STR基因座诊断唐氏综合征的方法。

【背景技术】

唐氏综合征(Down’s syndrome，DS)又称21-三体综合征，是人类最常见的染色体病。主要表现为智力低下，常合并多种畸形，生活基本不能自理。我国每年大约有26 600个DS患儿出生，平均每20分钟出生一个，每出生1例DS患儿大约给社会造成几十万元的经济负担，我国每年治疗DS的总费用超过25亿元人民币。迄今医学上尚无根治DS方法。降低DS患儿出生率的有效方法是产前诊断。通过产前诊断发现DS患儿，积极采取干预措施，避免DS患儿的出生。

由于DS筛查的普及，使产前诊断的需求呈明显上升的趋势。天津市2007年有近60 000例孕妇进行DS筛查，有3 600例左右孕妇需进行产前诊断-羊水细胞染色体检查。但实际羊水细胞染色体检查例数只有1 000例左右，检出染色体病胎儿20余例。也就是说有2 600例孕妇因未做羊水细胞染色体，而导致50余例DS患儿出生。羊水细胞染色体检查率低的原因除与孕妇的经济状况、对羊膜腔穿刺并发症的恐惧心理有关外，还与羊水细胞染色体报告时间过长有关。因为羊水细胞染色体的检测需要10～14天的细胞培养，21～28天方可出诊断报告，而且技术要求高，有培养失败的可能性。现有的细胞遗传学方法已不能满足日益增长的产前诊断需要。这就要求我们建立一种适合本民族的快速产前诊断DS的方法，与细胞遗传学互补，提高产前诊断率，真正做到防止先天缺陷儿的出生，降低我国人口出生缺陷率，提高我国人口素质。

已知机体的各种有核细胞均有人类全套基因组DNA，而基因组中含有大量的重复序列，其中不少是短串联重复序列(Short Tandem Repeat，STR)。STR基因座数量多、稳定具有高度多态性，可提供较多的遗传信息量，而且在上下代的传递过程中遵循孟德尔共显性遗传定律；STR基因座具有种族的差异；STR基因座的每一个基因代表着一条染色体，是目前检测染色体数目异常最合适的遗传学标记。国外已将扩增STR基因座作为诊断DS的方法之一。但由于STR基因座具有种族的差异，而且我国汉族群体占91.6％，因此有必要建立中国汉族群体扩增STR基因座诊断DS的方法。

【发明内容】

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种快速诊断唐氏综合征的方法。该方法是扩增21号染色体D21S1440、D21S11和PentaD STR基因座，测序胶检测扩增产物，通过对扩增产物条带及面积的分析达到诊断DS的目的。

本发明为实现上述目的所采用的方案是设计一种扩增21号染色体D21S1440、D21S11和PentaD STR基因座诊断DS的方法。其特征在于所述方法包括：

(1)用常规方法采集样本，于-20℃保存备用；所述样本是羊水样本、绒毛样本或外周血样本；

(2)提取样本中的DNA，其中：

外周血样本采用DNA提取试剂盒进行DNA提取；

羊水样本或绒毛样本采用盐析法进行DNA提取；

(3)选择与合成引物，其中：

a.D21S1440引物序列：

f-FAM-GAGTTTGAAAATAAAGTGTTCTGC；

r-CCCCACCCCTTTTAGTTTTA；

扩增产物为157～175bp；

b.D21S11引物序列：

f-FAM-GTGAGTCAATTCCCCAAG；

r-GTTGTATTAGTCAATGTTCTCC；

扩增产物为172～260bp；

c.Penta D引物序列：

f-FAM-GAAGGTCGAAGCTGAAGTG；

r-CTTGTGTCCAGATTAAAGAATTCTT；

扩增产物为398bp～433bp；

(4)PCR扩增