[发明专利]枯草芽胞杆菌及用该菌株制备γ-聚谷氨酸的方法

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus substilis)XN01，于2008年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，编号为CCTCC NO：M 208044。

2.一种用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)XN01制备γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

1)菌种培养保藏

将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)XN01的菌种在固体斜面培养基于25～40℃恒温培养，然后于2～4℃短期保藏；所述固体斜面培养基的组成，以重量体积百分比计，单位是g/100ml，其中蛋白胨0.8～1.0％、酵母膏0.5～1.0％、NaCl 1.0～2.0％以及琼脂1.5～2.0％，其pH值为6.0～8.0；

2)制备种子液

将上述斜面上约1cm²的菌株接入装有液体培养基的250ml的三角瓶中，装液量50ml/250ml摇瓶，于25～40℃下恒温培养10～24小时，转速为180～220rpm；所述液体培养基的组成，以重量体积百分比计，单位是g/100ml，其中葡萄糖0.1～1.0％，蛋白胨0.8～1.0％，酵母膏0.5～1.0％，NaCl 1.0～2.0％，pH值为6.5～8.0；

3)摇瓶液体发酵

将种子液转入灭菌后的液体发酵培养中，接种量为1～10％，装液量50ml/250ml摇瓶，于30～40℃恒温培养12～48小时，转速180～220rpm；所述的发酵培养基的组成，以重量体积百分比计，单位是g/100ml，其中糖质碳源1～10％，氮源0.4～3％，L-谷氨酸或谷氨酸钠5～12％，NaCl 0～5％，MgSO₄·7H₂O 0.01～0.1％， MnSO₄·H₂O 0.005～0.05％，K₂HPO₄0.05～0.5％，CaCl₂0.02～0.2％，pH值为6.5～8.0；

4)提取γ-聚谷氨酸

离心除去发酵液中的菌体，在上清液中加入3～4倍体积的无水乙醇，冷藏24小时后离心并收集沉淀，透析除去小分子后，冷冻干燥得到γ-聚谷氨酸。

3.根据权利要求2所述的制备γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：所述步骤3)氮源的含量为0.8～1.5％。

4.根据权利要求2所述的制备γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：所述步骤3)L-谷氨酸或谷氨酸钠的含量为8～12％。

5.根据权利要求2所述的制备γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：所述步骤3)发酵液pH值为7.0～7.5。

6.根据权利要求2～5任一所述的制备γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：所述步骤3)中的糖质碳源为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、果糖或为其混合物。

7.根据权利要求6所述的制备γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：所述步骤3)中的氮源为酵母膏、蛋白胨、牛肉浸膏、玉米浆、(NH₄)₂SO₄、硝酸盐或为其混合物。