[发明专利]一种中药微粉细胞破壁率的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药微粉细胞破壁率的测定方法。

背景技术

中药超微粉体是一种微米级新型中药粉体，主要通过机械粉碎使中药植物细胞壁破裂，促使有效成分快速释放。中药的有效成分主要存在于细胞内，在细胞完整无损的状态下，有效成份只能透过细胞壁及细胞膜释放被利用，当细胞壁(或膜)内外浓度达到平衡时，有效成分不再透过细胞壁(或膜)而被利用。因此中药有效成分的溶出及释放不完全导致了利用不完全，最终造成中药资源的浪费。采取超微粉碎技术，将细胞壁打破以使有效成份直接接触溶媒，能加快有效成分的溶出速度，提高溶出率。细胞壁的破裂程度直接影响着有效成分的溶出，关系到药效的发挥及临床疗效，因此，细胞破壁率常被认为是评价中药微粉质量的重要指标之一。

由于中药的超微粉碎技术是一个中药行业的新技术，很多技术关键有待深入研究，关于中药细胞破壁率测定的方法研究至今未见报道。中药材中绝大多数品种来源于植物，植物药材是由多种功能的植物细胞组成，关于植物药材细胞破壁率的研究不多，品种仅限于花粉与孢子类中药，方法主要是电镜扫描和血球计数板法，且未设定统一标准。

中药超微粉体细胞破壁率是其产品质量评价体系中一个关键参数，为保证超微粉体的质量，应建立中药超微粉体的细胞破壁率测定标准。

发明内容

为克服上述缺陷，本发明对中药超微粉体细胞破壁率的测定进行了大量研究工作，建立了中药超微粉体细胞破壁率的测定方法。

本发明提供了一种中药微粉细胞破壁率的测定方法，应用显微观测计数法，测定中药微粉的细胞破壁率；根据中药不同入药部位选择适宜的细胞类型，即特征细胞作为测定观测对象；选择原则为：有规则的细胞形状，易于观察与计数；细胞壁较厚，比较坚韧难破，对其种类有代表性。

上述中药微粉细胞破壁率的测定方法根据不同入药部位种类中药，选择观测的细胞如下：根及根茎类：首选木栓细胞，次选薄壁细胞，或选石细胞；皮类：木栓细胞；花类：花粉粒；叶类：表皮细胞；果实类：首选果皮细胞，次选表皮细胞，或选石细胞。

上述中药微粉细胞破壁率的测定方法，具体实施包括以下步骤：

1)取中药样品干燥，按常规方法制备中药细粉和微粉；

2)在0.05～1.5g范围内称取5-8个不同重量的步骤1)所述细粉，均匀分散于溶媒中，按显微观测计数法观察细粉中完整的特征细胞为显微计数物，并进行线性回归，绘制标准曲线，得回归曲线方程，反复进行此步骤至回归曲线方程中相关系数r大于0.9，再进行下一步；

3)分别按照步骤2)所述方法称取步骤1)所述微粉和细粉，按显微观测计数法观察其中完整的特征细胞为显微计数物，按下列公式计算细粉和微粉的显微特征细胞个数：

其中，X为每个视野内的特征细胞数，V为药液总体积，V′为盖玻片下药液体积，W为样品称取量；

4)根据样品细粉和微粉的显微特征细胞个数，按下列公式计算细胞破壁率：

Y＝(A-B)/A×100％，

其中，Y为细胞破壁率，A为细粉显微特征细胞个数，B为微粉的显微特征细胞个数。

上述步骤1)所述中药样品干燥为水分低于6％；所述常规方法制备中药细粉和微粉是将中药样品粉碎成80-100目的细粉，再将细粉进行超微粉碎至过300目的微粉。

上述溶媒为水合氯醛或稀甘油。

植物中药的组织结构除了草酸钙晶体、淀粉粒、菊糖、油滴等后含物外，它们主要有许多来源相同、形态机构相似、机能相同而又互相联系的细胞组成的细胞群，如薄壁组织中的薄壁细胞、木栓组织中的木栓细胞、韧皮部的韧皮纤维、木质部的木纤维等；另外，还有导管、管胞、筛管等输导组织及散在的石细胞、花粉粒等。在选择适宜的细胞破壁率评价指标时，由于微粉中的纤维、导管等长条形的细胞均已被截断，所以不宜作为具有代表性的细胞来进行评价。薄壁细胞由于壁薄，通常简单的机械力量即可将其破碎，因此仅在微粉显微观测中没有其它特征细胞可供选择时选用。木栓细胞在根及根茎、皮类中药中大量存在，其细胞壁稍厚，有规则的形状，有代表性，易于观察，适宜作为这几类中药微粉细胞破壁率测定的特征细胞。花粉粒壁坚实，内含丰富营养，单个散在，有规则的性状，这些都使其成为花类中药细胞破壁率测定的评价指标。表皮细胞在叶类、果实类中药中大量存在，均匀规则，壁坚韧，难以破裂，宜于作为测定该类中药细胞破壁率的评价指标。