[发明专利]零背景构建重组杆状病毒的方法无效
| 申请号： | 200810140644.5 | 申请日： | 2008-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN101372685A | 公开（公告）日： | 2009-02-25 |
| 发明（设计）人： | 张二辉;姚伦广;孙京臣;刘宗才;张红玲 | 申请（专利权）人： | 南阳师范学院 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/866 |
| 代理公司： | 郑州红元帅专利代理事务所（普通合伙） | 代理人： | 徐皂兰 |
| 地址： | 473061河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 背景 构建 重组 杆状病毒 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种构建重组杆状病毒的方法，其特征在于：该构建方法按下列步骤进行：
(1)构建以R6Kγ作为复制子的供体质粒，所述供体质粒为pRCDM，该质粒含有R6Kγ复制子，两个杆状病毒强启动子p10和polh，两个多克隆位点MCS1和MCS2以及转座同源臂Tn7L和Tn7R，按常规方法引入外源基因；
(2)封闭E.coli BmDH10Bac宿主菌基因组上的attTn7受体位点，获得BmDH10BacΔTn7；其中封闭宿主菌基因组上的attTn7受体位点的质粒为R6K-Cm-Tn7L-ZeoFRT-Tn7R，该质粒含有R6Kγ复制子，Tn7-L和Tn7-R以及两个抗性筛选标记Zeocin和chloramphenicol，其中，Zeocin抗性基因两侧带有FRT序列；
(3)常规方法转化携带外源基因的重组供体质粒pRCDM进入BmDH10BacΔTn7获得含重组Bacmid的阳性克隆；
(4)常规方法制备重组Bacmid DNA转染昆虫细胞制备重组杆状病毒。
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