[发明专利]一种对氧化还原循环反应剂敏感的报告菌株及其制备方法

权利要求书

1.一种对氧化还原循环反应剂高敏感的大肠杆菌报告菌株，其特征在于，由野生型大肠杆菌E.coli MC4100敲除sodA、sodB、katG、ahpCF、frdABCD基因，再利用基因置换技术将SoxS编码基因替换为GFPmut2报告基因得到。

2.根据权利要求1所述大肠杆菌报告菌株，其特征在于，所述大肠杆菌报告菌株命名为E.coli WMC-002，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号CGMCC No.2464。

3.一种权利要求1所述大肠杆菌报告菌株的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)利用条件复制质粒pKOV作为工具，敲除野生型大肠杆菌E.coliMC4100基因组中frdABCD、sodB、ahpCF、katG和sodA基因；

(2)设计soxS基因N末端和C末端的内侧引物和外侧引物以及GFPmut2基因的引物，利用交叉PCR反应构建含有报告基因GFPmut2与待置换目的基因SoxS的两端同源臂的融合PCR片段；

(3)将步骤(2)所得片段克隆到pKOV条件复制质粒，构建pKOV-GFPmut2重组载体；

(4)将所述重组载体pKOV-GFPmut2转化入步骤(1)所得的大肠杆菌菌株基因组中，通过两次同源重组，将步骤(1)所得的大肠杆菌菌株基因组SoxS编码基因置换成为GFPmut2报告基因。

4.权利要求3所述大肠杆菌报告菌株的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中soxS基因N末端的外侧引物序列如SEQ ID NO：8所示，内侧引物序列如SEQ ID NO：9所示；soxS基因C末端的内侧引物序列如SEQ ID NO：10所示，外侧引物序列如SEQ ID NO：11所示，GFPmut2基因的N末端引物序列如SEQ IDNO：12所示，C末端引物序列如SEQ ID NO：13所示。

5.权利要求1所述大肠杆菌报告菌株在检测氧化还原循环反应剂方面的应用。