[发明专利]用质谱检测多发性骨髓瘤特征蛋白的试剂

说明书

技术领域：

本发明涉及一种多发性骨髓瘤蛋白的检测试剂，特别是用质谱检测多发性骨髓瘤特征 蛋白的试剂。

背景技术：

多发性骨髓瘤(MM)是克隆B细胞紊乱，恶性浆细胞(PC)在骨髓中聚集导致溶骨病 变并且产生过多的单克隆蛋白。虽然对于多发性骨髓瘤的治疗已经取得了实质性的进展， 预防和早期发现仍是降低多发性骨髓瘤死亡率的有效途径和提高患者成活率的关键。

目前用于筛查多发性骨髓瘤的实验室检测方法敏感性和特异性均较低，已成为多发性 骨髓瘤早期检测的一个瓶颈。而且这些方法通常都有侵袭性，且花费昂贵，所以需要一种 高敏感性，特异性，非侵袭性，便宜又方便的方法。

已知蛋白质的分离和质谱分析可用于生物标志物的检测。虽然单克隆蛋白(M-蛋白) 是重要的检测多发性骨髓瘤的生物标记物，但它没有特异性，因为此蛋白也可以在意义未 定的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)的血清中找到。临床上仅以 单克隆蛋白一种蛋白作为血清学检测指标在敏感性和特异性上是远远不足的。

蛋白质的分离技术在蛋白质组学中应用分离技术有两个目的。第一、通过将蛋白质的 混合物分离成单一蛋白质或蛋白质小组以简化复杂的蛋白质混合物；第二、通过标记的方 法可以比较两个蛋白质的混合物样品中蛋白质的不同表现。其中主要的技术有双向电泳 (two-dimensional gel electrophoresis，2-DE)、高效液相层析(high-performance liquid chromatography，HPLC)、毛细管电泳(capillary electrophoresis，CE)、亲和 层析(affinity choromatography)、蛋白芯片(protein microarray)、磁性微球(magnetic beads，简称磁珠)和免疫组等。特别是蛋白芯片和磁珠两项新的蛋白指纹图谱技术克服 了以往技术的缺点，具有高灵敏度、高通量、结果重复性好、可机械化操作和方法灵活等 特点。待测样品来源广泛，不需作特殊前处理，可以直接点样检测，如血清、尿液及组织 液等；检测快速，一般一例标本的检测时间仅需约5分钟，从标本制备到出结果全过程仅 约1小时。蛋白芯片和磁珠两项新的蛋白指纹图谱技术有可能在体液中潜在生物标志 (biomarker)检测方面创造革命性突破(许洋，蛋白质指纹图谱技术在实验诊断与临床 医学中的研究进展，基础医学与临床，2007，27：134-142)。基质辅助激光解析/电离飞行 时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of fight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)与蛋白芯片分离技术联合应用即为表面增强激光解析/电 离飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ionization time of fight mass spectrometry，SELDI-TOF-MS)。2-DE最先被用于临床蛋白组学研究，但其对疏水性、强 酸性和强硷性蛋白的分辩率不够，而且不能检测低丰度蛋白，故实用价值受限。近来，蛋 白芯片与质谱技术(SELDI-TOF-MS)的结合，已被成功地用于肿瘤研究。

由于磁珠表面的结合面积远远大于蛋白芯片，从而磁珠的灵敏性比蛋白芯片更高(刘 建栋等，血液蛋白质组与质谱仪检测流程标准化初探。基础医学与临床， 2007，27：193-197)。磁珠具有优于二维电泳、蛋白芯片和其他质谱方法的特点，已被广泛 地用于肿瘤生物标志的筛查等研究(屠世良等，癌胚抗原阴性结直肠癌的检测和结直肠癌 预后相关生物标志，基础医学与临床，2007，27：926-931)。该技术具有操作简便、无需 离心样品、可直接分析原始生物样本(如血清、尿液等)、样本用量小等特点，同时适合 多样品平行检测和直接进行蛋白质全景式的搜索和分析，特别是对小分子量蛋白和低丰度 蛋白具有较高的捕获效果，可以与其他蛋白质组学方法互补，目前已被广泛地用于肿瘤标 志的筛查和临床检测，并均已获得很好的结果。

但迄今尚未见到采用磁珠捕获生物标志，并用质谱分析技术检测多发性骨髓瘤血清特 征蛋白的报道。

发明内容：

本发明的目的是提供一种新的检测多发性骨髓瘤的方法和试剂，通过建立检测多发性 骨髓瘤特征蛋白的优化质谱模型，提供用质谱法检测多发性骨髓瘤特征蛋白的试剂。