[发明专利]DNA结合蛋白的定量方法及定量用试剂盒

权利要求书

1.一种定量液体试样中的靶DNA结合蛋白的方法，包括以下步骤：

混合第一测定用试剂和液体试样，制备第一混合液，测定第一混合液中的第一并进扩散时间，其中，第一测定用试剂含有荧光标记核酸探针和第一非标记核酸探针，靶DNA结合蛋白可结合到荧光标记核酸探针和第一非标记核酸探针；

混合第二测定用试剂和液体试样，制备第二混合液，测定第二混合液中的第二并进扩散时间，其中，第二测定用试剂含有荧光标记核酸探针和第二非标记核酸探针，靶DNA结合蛋白不能结合到第二非标记核酸探针；及

根据第一并进扩散时间和第二并进扩散时间的差，定量液体试样中所含靶DNA结合蛋白。

2.权利要求1所述方法，其特征在于：定量步骤是根据第一并进扩散时间和第二并进扩散时间的差以及表示靶DNA结合蛋白量与并进扩散时间关系的数据定量液体试样中所含靶DNA结合蛋白的。

3.权利要求2所述方法，其特征在于：表示靶DNA结合蛋白量与并进扩散时间关系的数据是校准曲线，通过用荧光相关光谱法测定混合含荧光标记核酸探针的溶液和含一定量靶DNA结合蛋白的溶液制备的混合液中的并进扩散时间而获得。

4.权利要求1所述方法，其特征在于：第一测定用试剂所含第一非标记核酸探针的量比第一测定用试剂所含荧光标记核酸探针的量多；

第二测定用试剂所含第二非标记核酸探针的量比第二测定用试剂所含荧光标记核酸探针的量多。

5.权利要求1所述方法，其特征在于：第一测定用试剂所含第一非标记核酸探针的浓度与第二测定用试剂所含第二非标记核酸探针的浓度相同。

6.权利要求1所述方法，其特征在于：液体试样含核提取物。

7.权利要求1所述方法，其特征在于：靶DNA结合蛋白为转录因子。

8.权利要求7所述方法，其特征在于：转录因子是细胞因子的转录因子。

9.权利要求1所述方法，其特征在于：荧光标记核酸探针的核酸序列与第一非标记核酸探针的核酸序列相同。

10.权利要求1所述方法，其特征在于：荧光标记核酸探针、第一非标记核酸探针和第二非标记核酸探针的至少一个形成茎环结构。

11.一种用荧光相关光谱法定量液体试样中靶DNA结合蛋白的试剂盒，包括：

含有荧光标记核酸探针和第一非标记核酸探针的第一测定用试剂；及

含有荧光标记核酸探针和第二非标记核酸探针的第二测定用试剂；

其中，靶DNA结合蛋白可与荧光标记核酸探针和第一非标记核酸探针结合，不能与第二非标记核酸探针结合。

12.权利要求11所述试剂盒，其特征在于：第一测定用试剂所含第一非标记核酸探针的量比第一测定用试剂所含荧光标记核酸探针多，第二测定用试剂所含第二非标记核酸探针的量比第二测定用试剂所含荧光标记核酸探针的量多。

13.权利要求11所述试剂盒，其特征在于：第一测定用试剂所含第一非标记核酸探针的浓度与第二测定用试剂所含第二非标记核酸探针的浓度相同。

14.权利要求11所述试剂盒，其特征在于：荧光标记核酸探针的核酸序列与第一非标记核酸探针的核酸序列相同。

15.权利要求11所述试剂盒，其特征在于：荧光标记核酸探针、第一非标记核酸探针和第二非标记核酸探针的至少一个形成茎环结构。

16.权利要求11所述试剂盒，其特征在于：液体试样含核提取物。

17.权利要求11所述试剂盒，其特征在于：靶DNA结合蛋白为转录因子。

18.权利要求17所述试剂盒，其特征在于：转录因子为细胞因子的转录因子。