[发明专利]含乙二胺四乙酸和聚乙烯亚胺的组合、能透化微生物细胞壁的新组合物

权利要求书

1、用于透化微生物细胞壁的组合物，其特征在于其包括聚乙烯亚胺(PEI) 和乙二胺四乙酸(EDTA)的组合，并且在所述组合物中，PEI终浓度大于100 μg/ml，EDTA终浓度大于50mM。

2、权利要求1的组合物，其特征在于其进一步包括溶菌酶。

3、权利要求1和2任一项的组合物，其特征在于EDTA在终组合物中的 浓度在50-150mM之间，优选在50-100mM之间。

4、权利要求1-3任一项的组合物，其特征在于所述组合物中PEI浓度在 100-900μg/ml之间，优选在200-800μg/ml之间。

5、权利要求1-4任一项的组合物，其特征在于其不包含任何去垢剂。

6、在膜上计数和/或鉴定原存在于液体或气体介质中的微生物的方法，其 特征在于其包括下列步骤：

(a)将液体或气体介质经膜过滤，以使该介质中所存在的微生物滞留 于膜上或膜内；

(b)将所述膜和微生物与权利要求1-5的用于透化微生物细胞壁的组 合物接触；

(c)用交联剂将细胞固定于膜上；

(d)将微生物与一种或多种能透过微生物细胞壁的任选地标记的大分 子接触；

(e)检测穿透进微生物中的大分子。

7、权利要求6的方法，其特征在于其在步骤a)和步骤b)之间，包括培养该 微生物的额外步骤。

8、权利要求6和7任一项的方法，其特征在于步骤c)中用作交联剂的试剂 选自戊二醛、甲醛和多聚甲醛。

9、权利要求6-8任一项的方法，其特征在于在步骤d)中所用大分子为杂交 探针，优选寡核苷酸或PNA-型杂交探针。

10、权利要求9的方法，其特征在于该杂交探针与所述微生物的RNA杂 交。

11、权利要求10的方法，其特征在于该杂交探针与所述微生物的核糖体 RNA杂交。

12、权利要求9-11任一项的方法，其特征在于步骤d)中所用杂交探针所包 含的寡核苷酸序列与选自SEQ ID NO.1，2，3，4和5的序列具有至少80％相同性。

13、权利要求6-12任一项的方法，其特征在于在步骤d)中，所述大分子通 过与允许发出光或荧光信号的酶偶联来标记。

14、权利要求13的方法，其特征在于步骤e)中微生物的检测是通过化学发 光或荧光反应并用合适的界面识别发出的光信号而进行的。

15、权利要求6-14任一项的方法，其特征在于其在步骤d)和步骤e)之间， 包括将探针或引物与所述微生物的核酸特异性杂交的额外步骤。

16、权利要求6-15任一项的方法，其特征在于其在步骤c)和步骤e)之间， 包括将微生物中所存在的核酸进行特异性扩增的额外步骤。

17、权利要求6-16任一项的方法，其特征在于用于微生物检测的膜主要由 PVDF或组成。

18、权利要求1-5任一项的透化组合物使大分子穿透进分离的细胞或微生 物中的应用。

19、权利要求1-5任一项的透化组合物在计数和/或鉴定微生物的方法中的 应用。

20、包含PEI和EDTA组合的透化组合物作为药物佐剂的应用。

21、检测并计数微生物的试剂盒，其特征在于其包括：

—至少一种标记的大分子；和

—权利要求1-5任一项的用于透化微生物细胞壁的组合物。

22、权利要求21的试剂盒，其特征在于其还包括含交联剂的组合物，所述 交联剂选自戊二醛、甲醛和多聚甲醛。

23、权利要求21或22任一项的试剂盒，其特征在于所述标记的大分子由 杂交探针组成。