[发明专利]一种有指纹图谱的罗布麻叶提取物及其制备和分析方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种自中草药中提取的活性物质及其提取方法，特别涉及主要含有黄酮类活 性物质的提取物及其制备方法，确切地说是一种提取自罗布麻属植物罗布麻叶的一种有指纹 图谱的提取物及其制备和分析方法。

二、背景技术

我国罗布麻叶资源有三种：罗布麻属植物罗布麻叶(Apocynum venetum L.)又称红麻、 白麻属植物大花罗布麻叶[Poacynum hendersonni(Hook.f.)Wodson]和白麻属植物紫斑罗布 麻叶[Poacynum pictum(Schrenk)Baill]，统称为罗布麻叶，因属不同属植物，其黄酮成分 也有异，相互之间并无可比性。

据文献报道罗布麻叶(Apocynum venetum L.)含有黄酮及其糖苷、三萜及甾醇、木脂素、 香豆素、有机酸及酯、环醇、花色素、鞣质-、糖类和氨基酸等10余类成分。药理研究表明 黄酮类成分是其中的主要活性成分类别之一，化学研究表明罗布麻叶黄酮类成分以金丝桃 苷、异槲皮苷、三叶豆苷、6"-0-乙酰基金丝桃苷、黄芪苷、6"-0-乙酰基异槲皮苷、6"-0-乙 酰基黄芪苷、、槲皮素和山奈酚等成分含量较高。就同一种罗布麻叶而言，不同的提取方法 得到的提取物由于所含的黄酮类化合物种类不同、含量也不同，其药理、药性存在很大差异。 这就是说，不同提取方法得到的提取物都是不同的组合物，或者说都是一种新的组合物，虽 然都统称提取物。

目前提取罗布麻叶活性成分有以下几种方法：

1、先用水或醇提取，将回收溶剂后的提取物混悬于水中，分别用氯仿、醋酸乙酯、正 丁醇提取，划分成几个提取部分。再用硅胶柱或葡聚糖凝胶柱层析、分离成单组分物质。这 种方法适用于实验室对单一黄酮成分的研究，也不适合总黄酮的制备。

2、申请号02110431.X公开了一种“罗布麻有效部位的提取分离方法”，罗布麻提取 液经处理后通过D101，HPD100，HPD600大孔吸附树脂柱，先采用水洗脱至水洗脱液无色， 并用20—39％的乙醇水溶液洗脱，再用40—70％的乙醇水溶液洗脱。收集40—70％的洗脱 液浓缩后形成的浸膏即为有效部位，总黄酮含量为50-60％，该技术方案的缺点是：未能明 确所提供的有效部位由哪些黄酮成分组成，虽提供有效部位总黄酮含量为50-60％，但未明 确含量测定方法及对照品，众所周知，同一种样品不同的测定方法或不同的对照品所得到的 含量结果是不同的，比如NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH法测定的含量明显高于AlCl₃法，对照品 芦丁测定的含量明显高于金丝桃苷对照品，因罗布麻属植物罗布麻叶(新疆红麻除外)芦丁含 量为0.07％，金丝桃苷含量为0.35％，因此罗布麻属植物罗布麻叶及有效部位中总黄酮含量只 能采用AlCl₃法，对照品只能采用金丝桃苷。

3、申请号200410064551.0公开了“一种罗布麻提取物及其提取方法”，取罗布麻叶 300g，用10倍量40％乙醇水回流提取3次，每次0.5hr，合并提取液，室温下静置过夜、 过滤，去沉淀，滤液减压浓缩至总体积900mL，浓缩液加1％壳聚糖的乙酸溶液180mL，搅 拌2min，室温静置2—4hr，抽滤，弃去残渣，上清液过处理好的聚酰胺树脂柱，随后以600mL 水，用盐酸调pH为3后，进行洗脱除杂，然后用70％乙醇水溶液洗脱至无AlCl₃反应，收 集70％乙醇水溶液并减压浓缩至近干，水浴蒸干后，80℃烤箱干燥，得黄棕色至黄色粉末， 为罗布麻高纯提取物，出膏率为1.8％。罗布麻高纯提取物的金丝桃苷含量为17.8％、总 黄酮(以金丝桃苷计)含量为42.8％、水解后的槲皮素含量为36.7％。该技术方案所存在的 问题是：虽然提供了金丝桃苷含量、总黄酮含量、水解后的槲皮素含量，但不能明确提取物 由哪些黄酮成分组成，不能完整地反映该提取物质量，总黄酮(以金丝桃苷计)含量为42.8 ％，未达到五类原料药标准总黄酮含量为50％的要求。

4、申请号200510123187.5的公开了一种“罗布麻属植物罗布麻叶总黄酮提取物、其制 备及应用”。其制备方法是：滤液通过聚酰胺柱层析，首先用水冲洗8—12个柱体积，再用 不同浓度醇水溶液分段洗脱、分段收集、浓缩的方法，该法虽能得高纯度总黄酮，但因聚酰 胺柱每次层析后均需要碱-酸再生，故，该法成本高，工时长，不适用于制备口服五类原料药。

三、发明内容