[发明专利]一种有指纹图谱的罗布麻叶提取物及其制备和分析方法

权利要求书

1.一种有指纹图谱的罗布麻叶提取物的制备方法，以罗布麻属罗布叶(Apocynum venetum L.)粗粉为原料，包括提取、浓缩、分离和精制，其特征在于：所述的提取是原料粗粉用至少8倍量(w/v)70-80v/v％乙醇回流提取至少两次，得到乙醇提取液，乙醇提取液减压浓缩至1/4-1/6体积时冷却、静置、分离得到浓缩液，浓缩液用AB-8型或DM301型大孔树脂吸附分离，依次用水和20v/v％乙醇洗脱后再用50-75v/v％乙醇洗脱，收集50-75v/v％乙醇洗脱液，减压脱溶、干燥后得到提取物粗品；所述精制是提取物粗品用至少10倍量(w/v)乙醇与醋酸乙酯混合溶剂提取至少两次，乙醇与醋酸乙酯的体积比1∶5-10，分离得到精提液，精提液经减压脱溶、干燥后得到以金丝桃苷计的总黄酮量为50-60wt％的提取物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：混合溶剂乙醇与醋酸乙酯的体积比为1∶6-8。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：混合溶剂乙醇与醋酸乙酯的体积比为1∶7。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的乙醇与醋酸乙酯混合溶剂替换为甲醇与醋酸乙酯混合溶剂，甲醇与醋酸乙酯体积比为1∶5-8。

5.一种由权利要求1所述的方法制备的有指纹图谱的罗布麻叶提取物，是自罗布麻属罗布麻叶(Apocynum venetum L.)中提取的提取物，其特征在于：

(1)总黄酮含量以金丝桃苷计为50-60wt％，其中金丝桃苷含量为10-17wt％，异槲皮苷含量为10-16wt％；

(2)总黄酮苷元含量以酸水解后的槲皮素和山奈酚含量计，分别为25-35wt％和3.5-4.5wt％；

(3)原花色素含量以氯化花色素含量计为15-25wt％；

(4)总黄酮指纹图谱1中，1金丝桃苷、2异槲皮苷、3三叶豆苷、4 6″-O-乙酰基金丝桃苷、5黄芪苷、6 6″-O-乙酰基异槲皮苷、7 6″-O-乙酰基黄芪苷、8未知峰、9槲皮素、10山奈酚；

(5)、采用以下色谱分析条件测定罗布麻叶总黄酮指纹图谱

(i)色谱柱：采用ODS-C18色谱柱150mm x 4.6mm，5μm；

(ii)流动相采用线性梯度洗脱，其中A相为乙腈一甲醇，其中V/V比值为10∶1，B相为0.4％磷酸溶液；

流动相梯度：

(iii)检测波长为360nm：(iv)柱温为27℃；(v)流速1.0ml/min。

6.由权利要求5所述的提取物中所含的原花色素分析方法，使用分光光度计法，其特征在于：采用盐酸水解-正丁醇萃取法处理后测定萃取液吸光度，具体方法是：取提取物0.1g，用70％乙醇40ml溶解，加盐酸10ml和水5ml，置水浴中加热回流80分钟，取出冷却后过滤，残留物用70％乙醇洗脱至无色，滤液和洗液合并，加70％乙醇至250ml，取该溶液50ml，置圆底烧瓶中，减压浓缩至3ml，浓缩液移入分液漏斗，圆底烧瓶分别用水10ml和水5ml洗两次，洗液移入分液漏斗，合并的溶液用15ml正丁醇萃取，共萃取3次，合并正丁醇萃取液，加正丁醇至100ml，在545nm测定正丁醇液的吸光度；

用A x 500/75x m公式计算获得以氯化花色素计的原花色素百分含量，

式中：A：样品正丁醇液在545nm处的吸光度，

      75：氯化花色素在545nm处的吸收系数，

      m：样品称取量(g)。