[发明专利]鲨鱼软骨中提取硫酸软骨素钙的方法

说明书

技术领域

本发明涉及鲨鱼硫酸软骨素钙的制备方法，特别是一种从鲨鱼软骨中提取鲨鱼硫酸软骨素钙的方法

背景技术

硫酸软骨素作为结缔组织得重要组成部分，具有多种药理作用与生物功能，常被作为膳食补充剂使用，主要用于骨关节炎的辅助治疗。硫酸软骨素提取的传统方法主要有碱提酶解法、碱提法、超声波辅助法和乙酸提取法，按传统方法制成的硫酸软骨素主要以钠盐的形式存在，由于硫酸软骨素对钙的亲和能力比钠强，使用后，常引起血管及毛细血管部位的钙存积而导致淤点和血肿，普通的碱法生产工艺还存在纯度低、乙醇使用量大导致生产成本高的缺陷。

发明内容

本发明的目的是提出一种能克服上述缺陷，把硫酸软骨素由钠盐转变为钙盐的鲨鱼软骨中提取高纯度硫酸软骨素钙的方法。

本发明的技术方案是：一种鲨鱼软骨中提取鲨鱼硫酸软骨素钙的方法，依序包括有熟化、碱化、酶解、去蛋白、结晶、树脂预处理、树脂交换、超滤脱水、滤液钙化、结晶脱水干燥各工序过程组成，上述：

熟化：取鲨鱼软骨，在中性条件下，80-90摄氏度水煮1-3小时，冲净去除油脂再加水煮沸，保温2-5小时；

碱化：按鲨鱼软骨投料量的2％-10％加入氢氧化钠，按鲨鱼软骨投料量的3％-10％加入氯化钠，加热至30-40摄氏度，搅拌碱化1-5小时，待软骨溶解后停止碱化；

酶解：用盐酸调PH值为8-10，温度40-60摄氏度，按软骨投料量的0.1％-0.4％加入胰酶，酶解过程不断补加氢氧化钠；

去蛋白：用盐酸调整PH值为7-9，升温至80-100摄氏度，保温1-3小时，过滤，得到澄清溶液；

其特征在于：上述结晶采用二次结晶，先在去蛋白的澄清液中加入95％乙醇，使乙醇浓度达到70％，结晶过滤得到鲨鱼硫酸软骨素粗制品，再加水溶解，再加1-5％氯化钠，用氢氧化钠调PH值至7-9，加入过氧化氢，升高温度至40-70摄氏度，氧化时间控制在3-8小时，再调PH值至2-5，滤过，得澄清滤液，用氢氧化钠调PH值至6-7，加入95％乙醇，使乙醇浓度达70％，结晶过滤得到鲨鱼硫酸软骨素精制品；上述树脂预处理是用732强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，用水漂洗，浸泡，用1摩尔/升氢氧化钠碱洗，用1摩尔/升盐酸酸洗，再用水冲洗至PH值约6-7，按湿法装柱；上述树脂交换是取鲨鱼硫酸软骨素精制品，按重量加水溶解，制成5％-15％的溶液，上柱，控制好流出速度，并用酸度计在线检测流出液的PH值，当流出液的PH值由中性变为4时，开始收集流出液，当PH值由强酸变为4时，停止收集；上述超滤脱水是取上述离子交换溶液，超滤脱水，同时脱去分子量小于1000的多肽、氨基酸等杂质，提高鲨鱼硫酸软骨素纯度；上述滤液钙化是取超滤脱水后的浓缩液，用氢氧化钙水饱和液调节PH值至3-8，再加入氯化钙，搅拌溶解，过滤。

本发明的鲨鱼软骨中提取硫酸软骨素钙的方法由于采用二次结晶，用过氧化氢破坏蛋白质与鲨鱼硫酸软骨素的共价结合，使蛋白质中的硫酸软骨素游离出来，能有效的去除蛋白质等杂质，提高鲨鱼硫酸软骨素钠的纯度和含量，采用阳离子交换树脂，用柱层析法完成去钠过程，交换的鲨鱼硫酸软骨素浓度高，并可以精确控制离子交换过程中生成的鲨鱼硫酸软骨素，产品中钠含量低，超滤方法脱水既可以起到浓缩，又可以同时脱去小分子杂质，提高鲨鱼硫酸软骨素的纯度，同时可提高含钙量。还可节约乙醇的使用量，降低生产成本。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明：

取鲨鱼软骨200克，加水，加热至90摄氏度，煮2小时，取出软骨用水冲洗后，再加水煮沸4小时，加入10克氢氧化钠，10克氯化钠，40度下搅拌碱化5小时，用盐酸调PH值至8.5，加热并控制温度55摄氏度，加胰酶0.6克，分两次加入，第一次加入0.4克，三小时后加0.2克，不断搅拌，酶解反应6小时，用盐酸调整PH值为7.5，升温至80摄氏度，保温2小时，过滤得澄清滤液，加入95％乙醇，使乙醇浓度达到70％，每隔30分钟搅拌一次，结晶过滤得到鲨鱼硫酸软骨素粗制品，秤重80克，再加水480毫升溶解，再加4.8克氯化钠，用氢氧化钠调PH值至8.5，升高温度至50摄氏度，加入4.8毫升过氧化氢，氧化反应5小时，再用盐酸调PH值至2.5，过滤，得澄清滤液，用氢氧化钠调PH值至6.5，加入95％乙醇，使乙醇浓度达70％，每隔30分钟搅拌一次，结晶过滤得到鲨鱼硫酸软骨素精制品，用500毫升热水溶解沉淀物，用732阳离子交换树脂，用酸度计在线检测PH值，当流出液的PH值由中性变为4时，开始收集流出液，当PH值由强酸变为4时，停止收集，再经超滤截留大于1000道尔顿的硫酸软骨素酸，脱水浓缩后为300毫升，用氢氧化钙水饱和液调节PH值至6，再加入氯化钙140克，搅拌溶解，过滤，沉淀用无水乙醇脱水，65摄氏度真空干燥，得鲨鱼硫酸软骨素钙50克，经检测纯度达到98％，其它各项指标符合技术要求。