[发明专利]一种生产文多灵的方法

权利要求书

1.一种生产文多灵的方法，是将长春花多倍体细胞株接种于合成培养基中，于20～28℃，培养3～7天得到富含文多灵的细胞；

所述合成培养基为在基本培养基中添加0～4mg/L植物细胞生长素、0～4mg/L植物细胞分裂素，30～60g/L蔗糖、10～40μg/L乙酰辅酶A、0.5～1.5μmol/L苯丙三氮唑、5～30μmol/L苯环丙胺、10～40μl/L乙酸酐和10～40mg/L二硫苏糖醇得到的液体培养基；

所述基本培养基为按照Murashige&Skoog培养基的配方，将其中的CuSO₄·5H₂O和CoCl₂·6H₂O的添加量提高到0.1mg/L，再添加1mg/L的抗坏血酸得到的培养基；所述植物细胞分裂素为6-卞氨基嘌呤或激动素；所述植物细胞生长素为吲哚乙酸或α-奈乙酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述长春花多倍体细胞株接种于合成培养基的接种量为200～300g/L。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述合成培养是在80～130rpm/分转速摇培。

4.根据权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：所述长春花多倍体细胞株是将长春花愈伤组织细胞进行多倍体诱导培养得到的。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述长春花多倍体细胞株在合成培养之前在20～25℃，避光条件下扩增培养2～3周；

所述扩增培养基为基本培养基中添加0～4mg/L植物细胞分裂素，0～4mg/L植物细胞生长素，20～50g/L蔗糖得到的固体培养基；

所述基本培养基为按照Murashige&Skoog培养基的配方，将其中的CuSO₄·5H₂O和CoCl₂·6H₂O的添加量提高到0.1mg/L，再添加1mg/L的抗坏血酸得到的培养基；所述植物细胞分裂素为6-卞氨基嘌呤或激动素；所述植物细胞生长素为吲哚乙酸或α-奈乙酸。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述长春花多倍体细胞株在所述扩增培养之前进行继代培养3代以上；所述继代培养用培养基为基本培养基中添加20-60g/L蔗糖，1.0-5mg/L植物细胞生长素和1.0-5mg/L植物细胞分裂素的培养基；所述继代培养的条件为20～25℃，避光条件。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述多倍体诱导培养是将长春花愈伤组织细胞用含10-40mg/L秋水仙碱的基本培养基培养得到长春花多倍体细胞株。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述扩增培养基的pH值为5.6～7.0；所述合成培养基的pH值为5.8～7.0。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述方法中，还包括将所述富含文多灵的细胞用溶剂萃取获得含有文多灵的粗提物，再经过纯化获得文多灵；所述溶剂为体积百分浓度为95％的乙醇溶液或甲醇溶液。