[发明专利]一种用于检测莱克多巴胺的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种莱克多巴胺的检测领域，具体涉及一种用于检测莱克 多巴胺的试剂盒，本发明还涉及上述试剂盒在检测莱克多巴胺中的应用。

背景技术

莱克多巴胺(Ractopamine，RAC )，化学名称为N-[2-(4-羟基苯基)-2- 羟基乙基]-1-甲基-3-(4-羟基苯基)丙氨，化学结构如式(I)所示。市 场销售的莱克多巴胺为其盐酸盐，称为盐酸莱克多巴胺(RAC·HCl)，分子 式为C₁₈H₂₃O₃H·HCl，分子量为337.83，成白色粉末状，常温下暴露在空气中 性质稳定，微溶于丙酮，易溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，溶液成中性，pH 为6.0～7.0。

式I莱克多巴胺的化学结构

美国FDA规定人对于RAC的最大摄入量(ADI)为1.25μg/(kg体重·d)。 超过这一剂量，就会出现不同程度的中毒反应，其症状与动物中毒症状相 似，表现为肌肉震颤、四肢麻痹、心动过速、心律失常、腹痛、肌肉疼痛、 恶心、眩晕等。目前，莱克多巴胺在我国属于违禁药物。

生物素-亲合素系统(biotin-avidin system，BAS)，是70年代后期应 用于免疫学，并得到迅速发展的一种新型生物反应放大系统。由于它具有 生物素与亲合素之间高度亲和力及多级放大效应，并与荧光素、酶、同位 素等免疫标记技术有机地结合，使各种示踪免疫分析的特异性和灵敏度进 一步提高。BAS已经广泛应用于生物医学实验研究的各个领域，既可用于微 量抗原、抗体及受体的定量、定性检测及定位观察研究，亦可制成亲和介 质用于上述各类反应体系中反应物的分离、纯化。其性质概括如下：

(1)二者具有高度的特异的亲和性：生物素与(链霉)亲和素之间的 亲和性，至少是抗原抗体间的一万倍以上，且不易受外界干扰，复合物稳 定；

(2)桥联作用：二者均可偶联蛋白质、核酸、多糖和酶等生物活性物 质，同时还能与固相材料结合，通过这些特性可将它们偶联起来；

(3)多级放大作用：一个蛋白质(或核酸等)分子上可结合多个生物素 分子，而一个亲和素又可结合四个生物素，因而生物素与亲和素具有多级 放大作用。

BA技术的这些特性，使其在生物学、分子生物学、生物化学、临床医学 等领域广泛应用。

CN1766630A公开了一种检测动物源性食品中莱克多巴胺的酶联免疫 试剂盒，及使用该试剂盒对预处理的动物源性食品进行莱克多巴胺残留检 测的方法。该试剂盒组成为：包被了莱克多巴胺抗原或抗抗体的酶标板、 莱克多巴胺鼠单克隆抗体或多克隆抗体工作液、酶标记的抗抗体或酶标记 的莱克多巴胺抗原、莱克多巴胺标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩 洗涤液和浓缩复溶液。该试剂盒存在灵敏度低的缺陷。

目前，常用于莱克多巴胺残留检测的方法主要有微生物法和仪器分析 法，微生物法检测虽然经济、操作简便，但在样本中有其他文生物抑制剂 存在时，其灵敏度和特异性受到限制；高效液相色谱分析法、气谱、气质 联机法等单纯的仪器分析法，虽然灵敏度高，但样本前处理及测定操作烦 琐，费用高，不适宜大量样本筛查。

发明内容

本发明的目的是提供一种适于大批量样本快速检测、灵敏度较高且检 出限低于同类检测产品的用于检测莱克多巴胺的试剂盒。

本发明的另一目的是提供上述试剂盒检测莱克多巴胺的方法。

为实现上述发明目的，本发明的发明人在现有技术的基础上进行了大 量的研究和创造性的劳动，研制出了一种用于检测莱克多巴胺的试剂盒，所 述的试剂盒由下述成分组成：

①包被了莱克多巴胺抗原的酶标板；

②莱克多巴胺标准样溶液；

③莱克多巴胺抗体；

④链霉亲和素标记辣根过氧化物酶；

⑤生物素标记的第二抗体；

⑥底物显色液：所述的显色液包括底物溶液A和底物溶液B，所述的底 物溶液A包括无水醋酸钠8.2重量份、β-糊精2.5重量份、过氧化氢脲0.150 重量份、双蒸水1000重量份；所述的底物溶液B包括0.050重量份的四甲基 联苯胺TMB和5重量份的二甲基亚砜DMSO；

⑦终止液：所述的终止液为浓度为1.25mol/L的硫酸。

一种利用所述试剂盒检测莱克多巴胺的方法，包括下述步骤：