[发明专利]一种用于检测莱克多巴胺的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测莱克多巴胺的试剂盒，其特征在于所述试剂盒由 下述成份组成：

①包被了莱克多巴胺抗原的酶标板；

②莱克多巴胺标准样溶液；

③莱克多巴胺抗体；

④链霉亲和素标记辣根过氧化物酶；

⑤生物素标记的第二抗体；

⑥底物显色液：所述的底物显色液包括底物溶液A和底物溶液B， 所述的底物溶液A为无水醋酸钠8.2g、β-糊精2.5g、过氧化氢脲 0.150g、溶解于双蒸水1000ml中，调节pH至5.0；所述的底物溶液B 为0.050g的四甲基联苯胺TMB溶于5ml的二甲基亚砜DMSO；

⑦终止液：所述的终止液为浓度为1.25mol/L的硫酸。

2.一种利用权利要求1所述试剂盒检测莱克多巴胺的方法，其包 括下述步骤：

①处理样品：将剔除脂肪的动物肌肉组织样品于离心管中，加 入磷酸盐缓冲液，漩涡振荡器剧烈震荡2-5min，室温离心15min，取 上清液15mL移至分液漏斗，加入正己烷，充分混合后静置，取下层清 液备用；

②加样：将溶解于磷酸盐缓冲液中的莱克多巴胺标准样品或待测 样品加入到反应孔中，每孔加入100μL；

③竞争：将莱克多巴胺抗体用磷酸盐缓冲液稀释1000倍，加入到 反应孔中，每孔100μL，室温孵育60分钟，弃去孔中液体，洗液洗涤 4次；

④放大：将生物素标记的第二抗体用磷酸盐缓冲液稀释50,000 倍，每孔加入100μL，37℃反应30分钟后吐温20洗板4次，每孔加入 100μL 0.5％小牛血清/磷酸盐缓冲液稀释50,000倍的链霉亲和素标 记辣根过氧化物酶，37℃反应40分钟，吐温20洗板5次；

⑤用底物显色液进行显色：底物溶液A和底物溶液B混匀，显色 时每孔加入150μL的底物显色液；

⑥利用终止液终止反应：显色20分钟后每孔加入50μL浓度为 1.25mo l/L的硫酸，终止反应；

⑦读数：反应液在酶标仪450nm读取吸光值。