[发明专利]一种通用分子信标核酸探针及其检测DNA的方法

说明书

技术领域

本发明涉及DNA分析检测领域，更具体地，涉及一种通过使用通用分子信标核酸探针检测DNA的方法。

背景技术

基因检测可以做到疾病的早知道、早预防、早治疗。因此临床基因检测受到了广泛地重视，为了满足快速准确地检测和/或定量感染物(如病毒、细菌等)中，以及正常和不正常基因中的突变的基因序列，大量的基因检测技术正在不断的发展和完善。这些DNA检测不仅在疾病控制和治疗中有重要的意义，还在群体遗传学、药物开发、法学、癌症和食品安全等研究领域有着很重要的意义。

实现DNA定量及序列突变检测，最常用的是核酸探针技术，其中分子信标(MolecularBeacon)核酸探针应用最为广泛。分子信标是呈发夹结构的短链DNA，一端标记荧光基团，一端标记淬灭基团，其呈茎环闭合结构时不释放荧光，茎环结构打开，释放荧光。在对DNA进行检测和/或定量时，一般采用分子信标结合实时荧光定量聚合酶链式反应技术(Real-time PCR)。该方法中，分子信标根据目标DNA的序列进行设计和优化，分子信标探针在游离状态下是茎环闭合结构，不释放荧光，在扩增反应的退火步骤，分子信标与目标序列杂交，特异性结合形成双链，茎环结构打开，释放荧光，随着扩增反应进行，荧光信号增强，从而实现对目标DNA的检测。尽管这个技术是检测和鉴别样品中目标DNA分析的有力工具，但是所采用的分子信标都是目标序列特异性的，对于不同的体系都要根据目标物重新设计分子信标，重新优化分子信标序列，优化反应条件，这些问题限制了其在临床实验室环境下用于常规操作时的应用性，而且检测费用昂贵。最困难的问题之一是，在不同实验室的检测体系选用的分子信标探针序列不一样，检测和定量的条件不同，不利于测试步骤的标准化。

因此，本领域迫切需要开发普及性高、易用、灵敏、低廉、准确地检测和/或定量DNA的分析技术。

发明内容

本发明的目的就是针对现有技术的局限性，提供一种可用于检测和/或定量DNA分析的易用、灵敏、低廉、准确的分析技术。

本发明的技术方案如下：

在本发明的第一方面，提供了一种通用分子信标核酸探针，探针5’端标记荧光基团(比如FAM，TET，HEX，ROX，CY5，TAMRA)，3’端标记淬灭基团(如DABCYL)，该探针在游离状态下形成茎环的发卡结构，荧光淬灭，环部15-30个碱基，茎部4-7对互补碱基，其中环部或环部与5’端茎部或环部与两端茎部的序列为一通用序列，当探针与该通用序列的互补序列结合时，茎环结构打开，释放荧光。

上述通用分子探针的环部优选为十个AG的重复序列，5’端茎部序列优选为5’-CCGGG-3’。上面所列举的各荧光基团和淬灭基团的中英文全称见表1。

表1.分子信标5’和3’的荧光基团和淬灭基团标记的中英文全称