[发明专利]一种通用分子信标核酸探针及其检测DNA的方法

权利要求书

1.一种通用分子信标核酸探针，其5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团，在游离状态下形成茎环的发卡结构，荧光淬灭，环部为15-30个碱基，茎部为4-7对互补碱基，其中环部或环部与5’端茎部或环部与两端茎部的序列为一通用序列，当探针与该通用序列的互补序列结合时，茎环结构打开，释放荧光。

2.如权利要求1所述的通用分子信标核酸探针，其特征在于：所述环部为十个AG的重复序列。

3.如权利要求1所述的通用分子信标核酸探针，其特征在于：所述5’端茎部序列为5’-CCGGG-3’。

4.一种用于检测DNA的通用DNA杂交对，由权利要求1～3中任一权利要求所述的通用分子信标核酸探针和一通用序列引物组成，所述通用序列引物包括下述两个部分：a)通用区，位于通用序列引物的5’端并且与通用分子信标核酸探针中的通用序列互补；b)特异结合区，位于通用序列引物3’端，用于与目标序列特异性结合。

5.一种检测DNA的方法，在实时荧光PCR反应体系中加入通用分子信标核酸探针，用正反向引物对待测样品进行PCR反应，并在PCR的扩增热循环中，每次延伸之后降温至25℃检测荧光信号，根据荧光信号的变化对待测样品进行DNA定性和/或定量分析，其中：所述通用分子信标核酸探针5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团，该探针在游离状态下形成茎环的发卡结构，荧光淬灭，环部为15-30个碱基，茎部为4-7对互补碱基，环部或环部与5’端茎部或环部与两端茎部的序列为一通用序列；所述正反向引物特异性结合于目标DNA，其中之一为通用序列引物，它包括通用区和特异结合区两部分，所述通用区位于通用序列引物的5’端并且与通用分子信标核酸探针中的通用序列互补，所述特异结合区位于通用序列引物3’端，用于与目标DNA特异性结合；所述通用分子信标核酸探针与通用序列引物结合的T_m值高于通用序列引物与目标DNA结合的T_m值。

6.如权利要求5所述的检测DNA的方法，其特征在于：所述通用分子信标核酸探针的环部为十个AG的重复序列。

7.如权利要求5所述的检测DNA的方法，其特征在于：所述通用分子信标核酸探针的5’端茎部序列为5’-CCGGG-3’。

8.如权利要求5所述的检测DNA的方法，其特征在于：所述通用分子信标核酸探针与通用序列引物结合的T_m值比通用序列引物与目标DNA结合的T_m值高2-20℃。

9.如权利要求5所述的检测DNA的方法，其特征在于：在实时荧光PCR反应体系中所加的通用分子信标核酸探针和通用序列引物数量相等。

10.如权利要求5所述的检测DNA的方法，其特征在于：在实时荧光PCR反应体系中所加的通用分子信标核酸探针、通用序列引物和反向引物的数量比例为1∶1∶1.6。