[发明专利]一步法病毒气溶胶的采集及其浓度的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种对病毒气溶胶进行直接采样并检测其浓度的方法，属于 生物医学领域。

背景技术

我国二十多年来医院感染皆以呼吸道感染为主，而且还有增加趋势。在 呼吸道感染的病原体中病毒比细菌和真菌的种类多、毒力强、诊疗困难，且 新的病毒不断出现。国际气溶胶学会早已提出，全球应加强对病毒性气溶胶 感染的研究，虽然对呼吸道病原体的分析化验水平较高，方法较全，但如果 采不到病毒气溶胶标本，就只能是纸上谈兵，为此病毒气溶胶采样的研究就 显得十分重要了。

病毒气溶胶采样技术比细菌复杂、难度大、资料少，但应用广泛，在国 防、科研及实践中都具有重要意义。目前对病毒气溶胶的采样主要是二步法， 即先将采样介质涂抹于采样器皿上，再去进行病毒气溶胶采样，然后将带病 毒的采样介质洗下来，把它放在敏感细胞上培养，通过数噬斑来计算采到的 病毒气溶胶的数量。这种采样方式由于采样后需经过洗脱、转移等中间环节， 灵敏度大大降低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种新的一步法病毒气溶胶的采集及 检测方法，该方法将病毒气溶胶直接采到富集敏感细胞的环境中，采样后立 即拿去培养，不需要经过洗脱、转移等中间环节，最后可通过数噬斑判断计 算采样的病毒气溶胶数量，提高了检测的灵敏度和准确性。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一步法病毒气溶胶的采集及其浓度的检测方法，包括以下步骤：

(1)将与待检测的病毒相配对的敏感细胞进行富集培养，得到富集有大 量敏感细胞的培养体；

(2)当步骤(1)所制备的富集有大量敏感细胞的培养体中的敏感细胞 处于敏感期时，利用空气微生物采样器将待检测的病毒气溶胶直接采到该培 养体上，培养，使病毒与敏感细胞作用形成噬斑，通过噬斑数量计算待检测 的病毒气溶胶的浓度，计算式如下所示：

C=1000NV·ts---(1)]]>

式中，C——病毒气溶胶浓度，pfu/m³；N——采样到的病毒所形成的噬斑 数，pfu(噬斑形成单位)；V——微生物采样器的采样流量，L/min；ts—— 采样时间，min。

举例说明如下：如用安德森采样器，采样2分钟得到5个病毒(数噬斑 得来的)。则病毒气溶胶的浓度由下式计算：

至于与待检测的病毒相配对的敏感细菌具体是何种细菌，取决于待检测 病毒的具体种类，例如，如果待检测的是f₂、MS-2、Qβ、T系列噬菌体，则 与之相配对的敏感细菌是大肠杆菌；如果待检测的是28βФ噬菌体，则与之 相配对的敏感细菌是沙门氏菌；如果待检测的是流感病毒，则与之相配对的 敏感细胞是鸡胚纤维母细胞；如果待检测的是炭疽杆菌、霍乱弧菌、鼠疫杆 菌(注意严格防护)或其他菌种相对应的噬菌体，则与之相配对的敏感细菌是 相应的炭疽杆菌、霍乱弧菌、鼠疫杆菌或其他菌体。总之，本领域技术人员 可根据待检测病毒的具体种类很容易确定与之相配对的敏感细胞，并按照本 领域的常规方法制备富集有该敏感细菌的培养体。

作为参考，所述的培养体可分别按照以下两种方法制备：

(1)用于感染性病毒的采样：将与待检测的病毒气溶胶相配对的敏感细 胞，加到装有培养该敏感细胞的培养液的采样器皿上贴壁(如玻璃平皿、琼 脂条等)，通过繁殖形成富集有大量敏感细胞的培养体；上述所得到的培养体 主要用于感染性病毒在室内的采样，当在脏的环境中采样，采样时宜在上述 培养体中加入浓度约为4万单位/ml青霉素或链霉素的抗菌素去抑制空气中的 杂菌(如培养液中有抗菌素不必再加入)。采样时间以不出现杂菌为宜。