[发明专利]一种抗HIV药物的筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物的筛选方法，具体地，涉及抗HIV药物的 筛选方法。

背景技术

由人免疫缺陷病毒(HIV-1)引起的艾滋病是我国重点防治的重 大传染性疾病。目前，我国HIV-1感染者已达100万，而且感染人数 已经进入快速增长期。艾滋病不仅成为我国严重的卫生健康问题，同 时每年造成了上千亿的直接经济损失。据中国卫生部2006年底最新 通报，全国历年累计报告艾滋病近二十万例。

目前，艾滋病的防治主要是依靠药物治疗。临床上使用的抗HIV-1 的药物主要可分为核苷类和非核苷类逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制 剂、以及新型的跨膜糖蛋白抑制剂四大类。这些药物针对的靶点都是 HIV-1的结构蛋白或酶，但由于病毒高变异而产生的耐药性突变，导 致药物的作用活性迅速丧失。虽然目前普遍应用的高效抗逆转录病毒 治疗(HAART)和联合治疗方法，可以在一定程度上控制病毒的复制， 延长患者的生命，但这些治疗方案都面临着疗效间存在极大的个体差 异，严重的毒副作用，病毒突变重组所形成的多重耐药，以及高成本 等问题。目前，抗艾滋病病毒药物治疗中所面临的问题表明研发针对 崭新药物靶点的新型抗艾滋病药物仍然迫在眉睫。

病毒的耐药性是目前艾滋病药物治疗中最亟需解决的问题。 HIV-1之所以能够迅速产生针对现有临床应用的抗病毒药物的耐药 性，其主要根源在于这些药物所针对的靶点都是病毒本身。而病原病 毒天然就具有高变异的特点，在药物的选择压力下，很容易引起病毒 的迅速变异从而产生耐药。因此，解决HIV-1的耐药性问题的关键之 一在于必须突破传统的“以病原病毒本身为靶”的药物发展模式。

在生物进化的漫长过程中，宿主细胞会形成针对不同病原病毒 的防御体系，而病毒也会形成特异性的拮抗机制，以逃避宿主细胞的 抑制作用。在不影响宿主生存能力的前提下，特异性地上调宿主天然 的抗病毒机制不仅可以有效地抑制病毒的复制，同时也可以明显减小 甚至是避免药物对病毒的选择压力，从而降低耐药性突变发生的可能 性。因此，“以宿主为靶”的药物发展模式已经成为解决目前抗病毒 药物耐药性难题的重要研究策略之一。

发明内容

本发明的目的是提供一种筛选抗HIV药物的方法，具体地 将是一种以APOBEC3G为靶点的抗HIV-1药物筛选方法。

为实现上述目的，本发明首先构建了一种表达hA3G与报告基因 的融合蛋白以及Vif的细胞。在这种细胞中VIF蛋白特异性地结合 hA3G，并与细胞蛋白Cu15，elongins B和C以及Rbx1相互作用， 形成Skp1-cμllin-F-box(SCF)复合物，通过泛素介导的降解途径，导 致hA3G报告基因的降解。hA3G的降解可以通过考察报告基因编码 产物的量来实现。

这里的报告基因可以是本领域技术人员所熟知的常规报告基因， 优选为荧光蛋白基因，例如绿荧光蛋白(GFP)、红荧光蛋白(DsRed2) 以及深蓝萤光蛋白(CFP)，更优选为黄荧光蛋白的效果最为优化。 可以通过检测细胞的荧光值方便地进行观察。所述细胞为动物细胞。

上述细胞可通过如下方法构建：构建表达hA3G与报告基因融合 蛋白的表达载体以及表达Vif的表达载体，将所述表达载体分别或共 转染细胞，筛选表达hA3G与报告基因的融合蛋白以及Vif的阳性克 隆。其中，所述表达hA3G与报告基因的融合蛋白的表达载体优选为 pEYFP-N1-APOBEC3G，所述表达Vif的表达载体优选为pcDNA-hvif 质粒。

本发明筛选抗HIV药物的方法包括如下步骤：

(1)添加待测样品至上述的细胞；检测细胞报告基因表达产物 量的变化，选择能使报告基因表达产物量上升的样品；

(2)从步骤1)选择的样品中选择非蛋白酶体降解通路阻断的 样品。