[发明专利]一种抗HIV药物的筛选方法

权利要求书

1.一种抗HIV药物的筛选方法，其包括如下步骤：

（1）制备共表达hA3G与报告基因的融合蛋白以及Vif的细胞， 该细胞含有表达载体pEYFP-N1-APOBEC3G和表达载体 pcDNA-hvif；在表达hA3G与报告基因的融合蛋白以及Vif的细胞中 VIF蛋白特异性地结合hA3G，并与细胞蛋白Cu15，elongins B和C 以及Rbx1相互作用，形成Skp1-cμllin-F-box(SCF)复合物，通过泛素 介导的降解途径，导致hA3G报告基因的降解；

（2）添加待测样品至步骤1所述的细胞；

检测细胞报告基因表达产物量的变化，选择能使报告基因表达 产物量上升的样品；

（3）从步骤（2）选择的样品中选择非蛋白酶体降解通路阻断的 样品，其方法是：将步骤（2）选择的样品添加至表达P53与报告基 因的融合蛋白以及E4orf6的细胞，通过与对照比较，选择报告基因 编码产物量相对较低的样品；所述表达P53与报告基因融合蛋白以及 E4orf6的细胞通过如下方法构建：构建表达P53蛋白与黄荧光蛋白的 融合蛋白的表达载体以及表达E4orf6的表达载体，将构建的表达载 体共转染293T细胞，并筛选阳性克隆；所述表达P53与黄荧光蛋白 的融合蛋白的表达载体为pEYFP-N1-P53；所述表达E4orf6的表达载 体为E4orf6-myc。