[发明专利]一种免疫纳米磁珠诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫纳米磁珠诊断试剂盒，可应用在医学检测，属于生物医学 领域。

背景技术

免疫纳米磁性粒子技术是近年来发展起来的新技术，多用于分离、浓缩及诊断 等试验中。纳米磁性粒子能与蛋白质以共价方式结合而不影响其活性，所以常用来 捕获特定蛋白或分离蛋白。其原理如下：将某抗体偶联纳米磁性粒子，放入含目的 抗原的溶液中，经充分混合反应后，形成抗原抗体纳米磁珠混合物，用磁性体作用 于该溶液，可使结合于纳米磁珠上的目的物与其它组分分开，从而实现对目的物简 便快速分离的目的。同时它又能用作定量检测，可根据磁性强弱确定捕获抗体或抗 原量的多少。因此，免疫纳米磁性粒子是一种重要的载体和分离工具。在生物医学 尤其在免疫诊断领域，把这种表面带有抗原或抗体的纳米磁性粒子就称为免疫纳米 磁珠。目前，在一些发达的欧、美国家中，已将这种免疫纳米磁珠广泛应用在免疫 诊断领域，如：利用纳米磁珠可进行体内微量生物活性物质的定量测定，免疫分离 各种核酸与蛋白生物大分子，真核细胞的磁性免疫分离等。

由于免疫纳米磁珠的上述特性，应用纳米磁性粒子偶联特定抗原或抗体的试剂 盒是近年来研究的一个热点。申请号为01113129.2的中国专利，提供了一种免疫胶 体金和免疫纳米磁性粒子双标记快速诊断试剂盒，将目的蛋白的抗体或抗原标记一 纳米磁性粒子，形成一磁珠，再以此磁珠去标记胶体金，使该抗体或抗原同时带有 两个标示物。然后以此双标记了的抗体或抗原去结合目的抗原或抗体，最终被固定 在膜上的相应抗体或抗原捕获，形成一检测带。然后在肉眼对检侧带进行初步定性 或半定量检测的基础上，以磁性测定仪对该检测带进行定量检侧。

但上述发明需要首先用抗体或抗原标记磁性粒子，再用胶体金对抗体或抗原标 记过的磁性粒子再标记，制备过程复杂，不易质控，致使产品质量难以稳定，且额 外增加成本较大。

因此，有必要对上述试剂盒进一步改进。

发明内容

本发明的目的在于提供一种免疫纳米磁珠诊断试剂盒，该试剂盒制备过程简便， 成本低廉，易于质控，产品质量稳定，灵敏度高，可用于各种目的抗体或抗原的检 测。

本发明的另一目的在于提供一种应用免疫纳米磁珠进行检测目的蛋白的方法。

本发明的又一目的在于提供上述的免疫纳米磁珠诊断试剂盒用于检测全血、血 清、血浆、唾液、尿液、组织液及脑脊液多种样本目的蛋白的用途以及用于疾病预 警、诊断、疗效评估及预后方面的用途。

本发明提供的一种应用免疫纳米磁珠进行检测目的蛋白的方法，将目的蛋白特 异的抗体或抗原偶联于纳米磁性粒子，形成免疫纳米磁珠，以此偶联了特异抗体或 抗原的免疫纳米磁珠去结合目的抗原或抗体，与目的抗原或抗体结合的免疫纳米磁 珠最终被固定在膜上的相应抗体或抗原捕获，形成一检测带即T带；然后目测检测 结果或以磁性测定仪对该检测带进行定量检测，未与目的抗原或抗体结合的免疫纳 米磁珠被固定在膜上的抗体即一抗或抗抗体即二抗捕获，形成一对照带即C带。

其中，所述磁珠的制备是选用颗粒直径为10-800nm的纳米磁性粒子，优选选 用颗粒直径为50-300nm的纳米磁性粒子，将目的蛋白特异的抗体或抗原共价偶联 于纳米磁性粒子，形成免疫纳米磁珠。

所述免疫纳米磁珠的固相化是将免疫纳米磁珠喷到玻璃纤维素膜或聚酯膜上， 成为一固相垫，干燥待用。干燥优选低温冷冻干燥或37℃干燥。

该免疫纳米磁珠诊断试剂盒还包括将检测目的物相应的抗体或抗原喷到硝酸纤 维素膜上形成检测带即T带，同时将抗体即一抗或抗抗体即二抗喷到硝酸纤维素膜 上的另一位置，形成对照带即C带，以蛋白液封闭，干燥。此处C带之所以可以固 定有一抗或二抗，是因目的物而异的，当目的物为抗原时，免疫纳米磁珠上偶联的 是目的抗原的特异抗体，免疫纳米磁珠经过T带时，被固定在膜上的目的抗原相应 抗体捕获，形成双抗体夹心，未与目的抗原结合的免疫纳米磁珠继续迁移，经过C 带时，被固定在膜上的免疫纳米磁珠上的特异抗体的抗体即抗抗体或二抗捕获。同 理，当目的物为抗体时，免疫纳米磁珠上偶联的是目的抗体的特异抗原，免疫纳米 磁珠经过T带时，被固定在膜上的目的抗体相应抗原捕获，形成双抗原夹心，未与 目的抗体结合的免疫纳米磁珠继续迁移，经过C带时，被固定在膜上的免疫纳米磁 珠上的特异抗原的抗体即一抗捕获。