[发明专利]一种免疫纳米磁珠诊断试剂盒

权利要求书

1.一种免疫纳米磁珠诊断试剂盒，包括基底、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所 述的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫按顺序依次排列于基底上，所述的样品垫用于 添加样品；结合垫含有免疫纳米磁珠，所述的免疫纳米磁珠为将抗β-hCG单克隆抗体偶联于 纳米磁性粒子，硝酸纤维素膜上有检测带即T带和对照带即C带，所述的检测带上有固定于 膜上的抗β-hCG多克隆抗体，所述的对照带上有固定于膜上的羊抗鼠多克隆抗体；

所述免疫纳米磁珠的制备是选用颗粒直径为300nm的纳米磁性粒子，将抗β-hCG单克 隆抗体共价偶联于纳米磁性粒子，形成免疫纳米磁珠；所述免疫纳米磁珠的固相化是将免疫 纳米磁珠喷到玻璃纤维素膜或聚酯膜上，成为一固相垫，干燥待用；

所述的检测带即T带是将抗β-hCG多克隆抗体喷到硝酸纤维素膜上形成，对照带即C 带是将羊抗鼠多克隆抗体喷到硝酸纤维素膜上形成，以蛋白液封闭，干燥；

所述的试剂盒中一组样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫构成一个检测通路，所述 的试剂盒中含有一个或多个并列的检测通路，用于一个或多个样品中目的蛋白的同时检测。

2.根据权利要求1所述的免疫纳米磁珠诊断试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒形式为检测 板或检测条。

3.一种根据权利要求1所述的免疫纳米磁珠诊断试剂盒进行检测目的蛋白的方法，其特征在 于，将抗β-hCG单克隆抗体偶联于纳米磁性粒子，形成免疫纳米磁珠，以此偶联了抗β-hCG 单克隆抗体的免疫纳米磁珠去结合目的抗原，与目的抗原结合的免疫纳米磁珠最终被固定在 膜上的抗β-hCG多克隆抗体捕获，形成一检测带即T带；然后目测检测结果或以磁性测定仪 对该检测带进行定量检测，未与目的抗原结合的免疫纳米磁珠被固定在膜上的羊抗鼠多克隆 抗体捕获，形成一对照带即C带；所述的目的抗原为β-hCG；

其中，所述的将抗β-hCG单克隆抗体偶联于纳米磁性粒子的步骤为：

（1）使用磁性分离器用1mLMES冲洗纳米磁性粒子；

（2）第二次冲洗时，将纳米磁性粒子重新悬置在含有10mgEDC或CMC的0.25mLMES中，室 温下在混合器中混匀10min；

（3）将抗β-hCG单克隆抗体加入到纳米磁性粒子；室温混匀2小时；

（4）用1mLPBS冲洗磁珠3次；

（5）用封闭液中重新悬浮磁珠。

4.一种应用权利要求1所述的免疫纳米磁珠诊断试剂盒进行检测目的蛋白的方法，包括：

（1）将被检测样品加于样品垫上，该样品在吸水垫作用下沿样品垫向吸水垫方向前移；

（2）样品在结合垫中与免疫纳米磁珠反应并继续向吸水垫方向前移，结合目的抗原的免 疫纳米磁珠在通过检测带时被固定在膜上的抗β-hCG多克隆抗体捕获而形成阳性或弱阳性检 测带；所述的目的抗原为β-hCG；

（3）免疫纳米磁珠继续前移被固定在膜上的羊抗鼠多克隆抗体捕获，形成对照带；

（4）目测检测结果或以磁性测定仪对该检测带进行定量检测；

所述免疫纳米磁珠的制备是选用颗粒直径为300nm的纳米磁性粒子，将抗β-hCG单克 隆抗体共价偶联于纳米磁性粒子，形成免疫纳米磁珠；所述免疫纳米磁珠的固相化是将免疫 纳米磁珠喷到玻璃纤维素膜或聚酯膜上，成为一固相垫，干燥待用；

所述的检测带即T带是将抗β-hCG多克隆抗体喷到硝酸纤维素膜上形成，对照带即C 带是将羊抗鼠多克隆抗体喷到硝酸纤维素膜上形成，以蛋白液封闭，干燥。