[发明专利]一种工业用大麻籽抗氧化肽的制备方法及应用

权利要求书

1.一种工业用大麻籽抗氧化肽的制备方法，其特征在于，所述的方法包括：

(1)以工业用大麻籽为原料，制备工业用大麻籽蛋白；

所述工业用大麻籽蛋白的制备方法包括：

1)将工业用大麻籽筛选除去杂质后进行分级，然后机械砻碾脱壳；脱壳后的得到的麻仁在43℃，34Mpa的条件下萃取2小时，将油脂分离后的萃取产物进行粉碎，然后相同条件下再萃取2小时，CO₂超临界萃取后得到低温蛋白粕；

2)将低温蛋白粕进行粉碎，用60-100目筛过筛之后，在蛋白粕中加入8-11倍的40～50℃水，搅拌混合均匀，再用碱液调节pH值至8～10，保温搅拌20min，过滤去除不溶性杂质，获得蛋白溶液粗品；

3)用稀盐酸溶液调节蛋白溶液粗品的pH值至4.5～5，沉淀之后，进行离心分离；离心分离后取沉淀，再用pH值为4.5～5的水洗涤3～4次，继续进行离心分离，取沉淀；在沉淀经均质后，用pH值为8～10的氢氧化钠溶液调节沉淀pH值至6～7，得到浓缩蛋白溶液；

4)将上述浓缩蛋白溶液经过115-130℃高温瞬时灭菌，灭菌的时间为2-4s，之后进行喷雾干燥，得到工业用大麻籽分离蛋白；

(2)称取工业用大麻籽蛋白，加入去离子水搅拌均匀，在80～90℃的条件下进行预处理，然后降温，用NaOH溶液调pH至8.0～9.5，按酶和底物重量比为0.5～3％加入蛋白酶，控制反应体系的pH值8.0～9.5，反应1-3h后，在85～100℃灭酶，再用HCl溶液调节pH至6.8～7.2，最后经冷冻离心，取上清液进行浓缩，得到的溶液即为工业用大麻籽蛋白抗氧化肽酶解液；

(3)将步骤(2)所得的工业用大麻籽抗氧化多肽酶解液，采用大孔吸附树脂进行静态脱盐，在150～300r/min转速下，加入工业用大麻籽蛋白抗氧化肽酶解液，搅拌后，加去离子水，洗至电导率小于15μs/cm，再加体积百分比为70％～85％乙醇溶液洗脱，洗脱液旋转蒸发浓缩，冷冻干燥，得到所述的工业用大麻籽抗氧化多肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤(3)中搅拌的时间为3-8小时。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤(2)包括：

按底物浓度45-55mg/mL，称取工业用大麻籽蛋白于酶反应器中，加入去离子水搅拌均匀，80～90℃预处理10～20min，再降温至50℃，用0.5-1.5mol/L NaOH溶液调pH至8.0～9.5，按酶和底物重量比为0.5～3％加入蛋白酶，控制反应体系的pH值8.0～9.5，反应结束后，85～100℃灭酶5～10min，用0.5-1.5mol/L HCl调节pH至6.8～7.2，7000～10000r/min冷冻离心10～20min，上清液浓缩，得到的溶液即为工业用大麻籽蛋白抗氧化肽酶解液。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤(2)中底物浓度为50mg/mL。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的蛋白酶包括Alcalase 2.4L碱性蛋白酶、2709碱性蛋白酶、胰蛋白酶或木瓜蛋白酶。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤(3)替换为：将步骤(2)所得的工业用大麻籽抗氧化多肽酶解液，采用大孔吸附树脂进行动态脱盐，采用的柱子条件：2.6×30cm；上样流速：1～2mL/min；水洗流速：1～2mL/min；乙醇洗脱流速：0.5～1mL/min；上样量：200～300mg，70％～85％乙醇洗脱，洗脱液旋转蒸发浓缩，冷冻干燥后即得所述的工业用大麻籽抗氧化多肽。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的树脂为DA201-C型树脂。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述工业用大麻籽分离蛋白中蛋白纯度≥92％，总氨基酸含量≥85％。

9.根据权利要求1所述的制备方法所制备的工业用大麻籽抗氧化肽在制备营养强化剂、保健品、动物食品、食品中的抗氧化剂、化妆品或护肤品的应用。