[发明专利]同步分离提取与纯化荷叶中黄酮、生物碱和多糖的方法

说明书

技术领域

本发明属农、林产品深加工领域，涉及以荷叶为原料提取黄酮、荷叶生物碱和荷叶多糖的方法。

背景技术

我国荷叶资源相当丰富，被列入了第2批“既是食品又是药品”的名单，可以作为生产保健食品的原料。长期以来，荷叶在食用及药用两方面均有广泛的应用。荷叶分布我国大部地区，主产于江西、湖南、湖北、浙江、江苏等地。荷叶具有解暑清热、生发清阳、散瘀止血等功效，临床亦将其广泛用于肥胖症及高脂血症，并取得了较好疗效，综合利用价值很高。

荷叶中具有生理活性的物质主要为黄酮类物质、生物碱和荷叶多糖。目前获得这些有效成分的提取方法主要为水或有机溶剂直接浸提或者回流浸提。国内外对荷叶中功能成分的应用研究主要集中于单一地提取黄酮或生物碱成分，在提取这些成分的同时舍弃了其他两种功能成分，或者只是简单的生产醇提物或水提物，技术含量不高，难以实现高附加值的产业升级要求。未见有综合分离提取利用荷叶三种功能成分黄酮、生物碱及荷叶多糖的研究报道。这主要是在提取单一成分时，提取条件会破坏其他成分或对其他成分提取率低，并使得到的提取物杂质高，增加后续纯化的难度和要求。如用水或有机溶剂提取黄酮时，部分生物碱也能提取出来，得到的粗黄酮杂质高，增加了后续纯化的难度，同时也影响生物碱的再提取。同样在提取生物碱时，提取条件影响黄酮的稳定性，大大影响黄酮的再提取，得到的粗生物碱杂质高，增加了后续纯化的难度。在用水提取多糖时，前处理复杂，提取的粗多糖杂质高、色泽深、很难纯化。因此必须找到一种兼顾了黄酮、生物碱和多糖的化学性质，充分考虑了各种成分提取过程中的相互影响、活性和提取率的同步提取方法，使三种活性成分提取率高，纯度高，提取效率高，荷叶资源利用率高。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效、综合提取荷叶中黄酮、生物碱和多糖三种主要功能成分的提取方法。

本发明的具体工艺步骤如下：

(1)将新鲜荷叶用含0.05-0.15％NaCl的磷酸水溶液(pH＝3.0-4.0)常温浸泡3min，淋洗沥干后干燥，粉碎至18目-30目，微波预处理1min-3min；

(2)将经微波处理后的荷叶干粉，加入25-30倍40-70％的碱性有机溶液，调pH＝9.0-14.0，加入抗氧化剂0.1g/Kg-0.3g/Kg干荷叶，在65℃-85℃下浸提1-2小时，提取1次，以提取荷叶黄酮；

(3)将(2)中所得荷叶粉残渣，加入25-30倍60％-95％的酸性有机溶液，调pH＝1.0-6.0，加入抗氧化剂0.3g/Kg-0.5g/Kg干荷叶，在65-85℃下浸提1-2小时，提取2次，以提取荷叶生物碱；

(4)将(3)中所得荷叶粉残渣，加入25-30倍的中性水，调pH＝6.0-8.0，在65℃-85℃下浸提1-2小时，提取1次，以提取荷叶多糖；

(5)将(2)中所提取的荷叶黄酮粗提物，经离心、过滤后的上清液，减压蒸馏回收乙醇后，用10％盐酸调溶液至pH＝6.5-7.0，再经离心、过滤，取上清液配制成1-5mg/mL上样液，经弱极性大孔树脂吸附后用纯水、10％-30％乙醇分别冲洗除去杂质，50-90％有机溶液洗脱，收集洗脱液，在真空度0.06Mpa-0.09Mpa、65-85℃下蒸发浓缩，回收浸提液中的有机溶剂，得到浓缩液，经真空干燥制得荷叶黄酮成品；

(6)将(3)中所提取的荷叶生物碱粗提物，经离心、过滤后的上清液，减压蒸馏回收乙醇后，经酸性溶液复溶，酸性条件下有机溶剂脱色，调节pH＝7.0后离心、过滤除去鞣质；取上清液，调节pH≥12.0，并配制成0.1mg/mL-2mg/mL上样液，经弱极性大孔树脂吸附后，用纯水、10％-30％乙醇分别冲洗除去杂质，50-90％有机溶液洗脱，收集洗脱液，在真空度0.06Mpa-0.09Mpa、65℃-85℃下蒸发浓缩，回收浸提液中的有机溶剂，得到浓缩液，经真空干燥制得荷叶生物碱成品；

(7)将(4)中所提取的荷叶多糖粗提物，经离心、过滤后的上清液浓缩至糖浓度为2-6％，调节pH＝6.0-7.0，保持溶液温度为40℃-60℃下条件下，经弱极性大孔树脂动态吸附脱色后，水洗出滞留于柱中的荷叶多糖，并浓缩至糖浓度4％-6％，用saveg除蛋白后，在真空度0.06Mpa-0.09Mpa、65℃-85℃下蒸发浓缩，得到浓缩液，经真空或冷冻干燥制得荷叶多糖成品。

本发明所述的步骤(2)黄酮提取过程中的有机溶剂为甲醇、乙醇或者正丁醇，抗氧化剂可以是特丁基对苯二酚、丁基羟基茴香醚(BHA)或者二丁基羟基甲苯(BHT)等。