[发明专利]一种检测单纯疱疹病毒I型IgM抗体的化学发光试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，更具体地说，涉及一种检测单纯疱疹病毒I型IgM抗体的化学发光试剂盒及其制备方法。

背景技术

单纯疱疹病毒(HSV)属于疱疹病毒的一种。该病毒的中心为DNA，外有162个壳微粒组成衣壳，呈20面体，周围有含脂质的包膜，病毒颗粒大小为150-200nm。根据血清学、流行病学特点，单纯疱疹病毒分为HSV-I和HSV-II两型。临床表现以皮肤粘膜单纯疱疹病毒感染较常见，尤以唇单纯疱疹、生殖器疱疹为代表。

原发感染后，机体最先出现免疫球蛋白M(IgM)，随后出现免疫球蛋白A(IgA)及免疫球蛋白G(IgG)。抗体能防止病毒播散，但不能阻止复发。检出特异性IgM阳性或双份血清特异性IgG抗体效价上升四倍或四倍以上，可提示HSV近期感染。

HSV主要引起疱疹性口腔炎、疱疹性角膜结膜炎、疱疹性脑膜炎、疱疹性外阴阴道炎、湿疹性疱疹、新生儿疱疹等。生殖器官以外部位的HSV感染多由HSV-I型引起(占95％)，而生殖器官的HSV感染，主要由HSV-II型引起(占78％)。IgM抗体阳性提示近期有HSV感染。IgG抗体阳性(效价无变化)，说明既往感染过，且有一定免疫力。

孕早期感染HSV者可导致流产，妊娠中、晚期感染者，可引起胎儿和新生儿发病。

单纯疱疹病毒抗体的检测方法主要有放射免疫分析法，荧光免疫分析法和酶联免疫分析法等。放射免疫分析虽然高灵敏、高特异，但存在有效期短、具有放射性污染的缺点。荧光免疫分析法虽然特异性强、敏感性高、速度快，但非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，程序也比较复杂。酶联免疫分析虽然灵敏度高、特异性强，但存在内源性酶干扰、底物大部分有毒或为致癌物质等缺点。

化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析，是继放射免疫分析和酶免疫分析之后发展起来的一种超高灵敏度的微量测定技术。化学发光免疫分析将抗原与抗体的高特异性免疫反应与高灵敏的化学发光检测技术相结合，将化学发光物质标记抗原或抗体，再进行免疫结合反应，即可进行定性、定量测定。该方法具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定、无污染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析理想的取代者，是目前免疫定量分析最理想的方法。

用化学发光免疫分析方法检测单纯疱疹病毒I型IgM抗体的原理是，将待测样品加入到包被有抗人μ链单克隆抗体的白色不透明微孔板中，随后加入中和抗原与待测样品中的IgM抗体特异性结合，再加入酶标记的中和抗原特异抗体形成固相抗人μ链单克隆抗体-IgM抗体-抗原-酶标抗体复合物，洗涤去除未反应的游离成分。然后，加入上述酶的发光底物液，利用化学反应释放的自由能激发中间体发光，从而检测样品中待测分子浓度。

人免疫球蛋白的重链具有抗原特异性，其中IgM的重链为μ链亚型。特异性IgM抗体的升高可作为近期感染的指标，因此IgM抗体的检出具有很重要的临床意义。抗人μ链单克隆抗体多用于捕获法检测IgM抗体，包被于固相载体上，结合样品中的所有IgM。

一般采用戊二醛偶联法将标记酶与抗体偶联。通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合。待标记的抗体用戊二醛偶联法与碱性磷酸酶偶联，对磷酸缓冲液(PBS)充分透析，加入等体积甘油，-20℃以下保存备用。

一般采用方阵法确定中和抗原和酶标抗体的浓度。待确定浓度的组分按方阵以不同稀释度加入到固相包被载体中，根据相对发光强度(RLU)选择适宜的浓度。

试剂盒试剂中，常用的防腐剂有proclin 300、NaN₃、硫柳汞等。

现有市场上检测单纯疱疹病毒I型IgM抗体的试剂盒多为酶联免疫分析试剂盒，反应终止液为硫酸，具有腐蚀性，同时还存在内源性酶干扰、底物大部分有毒或为致癌物质的缺点，吸光度的检测也易受到划痕等多种外在因素的影响。

发明内容

为了克服酶联免疫分析受多种外在因素干扰、检测灵敏度低，底物大部分有毒的不足，本发明提供了一种检测单纯疱疹病毒I型IgM抗体的化学发光试剂盒，包含阴性、阳性对照品，抗人μ链单克隆抗体包被的固相载体，中和抗原，酶标记的单纯疱疹病毒I型抗体，化学发光底物液和浓缩洗涤液。其中，所述的酶为碱性磷酸酶，所述的化学发光底物液含有1，2-二氧乙烷类衍生物。