[发明专利]一种检测甲状腺球蛋白抗体的化学发光免疫分析测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学临床血液免疫检测分析领域，具体的提供了一种检测灵敏高、试剂稳定性好，操作时间短、步骤简单且对操作人员无放射性危害的甲状腺球蛋白抗体化学发光免疫测定试剂盒。

背景技术

甲状腺球蛋白(Tg)是一种相对分子量为660KD的糖蛋白，其抗体(Anti-Tg)是自身免疫性甲状腺疾病(AITD)的重要标志物，具有较高的诊断意义。

Anti-Tg包括IgG1、IgG2、IgG3和gG4 4个亚目，以IgG1和IgG4占优势，但IgG2功能活性最高。Anti-Tg与甲状腺球蛋白(Tg)结合后，通过FC受体与结合抗体的相互作用激活NK细胞而攻击靶细胞，导致甲状腺细胞破坏。Anti-Tg可以影响Tg抗原的摄取、加工，因而可以增强或抑制非显性致病性T细胞抗原决定簇的产生及递呈，进而影响AITD时的细胞免疫。Anti-Tg对致病性甲状腺球蛋白T细胞抗原决定簇的识别可以呈现中性、抑制或增强效应，这主要取决于Anti-Tg所识别的抗原决定簇有无个体遗传背景，在某些AITD患者，其净效应可能是加重疾病以及对非显性T细胞抗原决定簇自身免疫反应的扩大，从而导致AITD的发生及恶化。Anti-Tg与Tg结合位点上存在着酶的催化位点，因此，Anti-Tg有酶活性，可以催化Tg水解，导致血及甲状腺中Tg减少。血中Tg的减少可以降低机体免疫系统对Tg的暴露，因而对Tg的自身免疫反应减弱。另一方面，由于甲状腺激素合成依赖甲状腺过氧化物酶(TPO)对天然Tg的识别，因此，Tg减少必然导致T3、T4合成减少。值得注意的是，分泌Anti-Tg的B淋巴细胞主要存在于甲状腺内，当甲状腺内Anti-Tg积累到一定浓度时，不仅Tg分解增加，也可导致其它与Tg无关的蛋白发生水解，从而可能造成全身性的蛋白作用增强及组织损伤。

由于传统的放射免疫分析方法具有对操作人员有放射性危害、废弃物处理问题、产品保质期短、操作时间长等问题，而酶联免疫分析法的灵敏度较低，存在操作步骤繁琐，操作时间周期长，易造成结果假阳性或假阴性等问题，从而需要人们寻找一种更为安全、灵敏和可靠的免疫检测分析方法。本发明采用高活性的辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗，以双氧水、鲁米诺及增强剂为发光底物，其原理是H₂O₂在HRP作用下氧化鲁米诺使其达到激发态，当其回到基态时发出420-515nm的光，再通过发光分析仪来检测光信号。HRP酶促发光10分钟即可达到发光高峰，可缩短操作时间，同时微孔板反应模式有利于进行样品的批量检测，适合于我国的现有国情。

发明内容

本发明避免了放射免疫分析中放射性物质对操作人员的放射性危害，解决了放射性废弃物的处理问题，使产品的保存期更长；与酶联免疫分析方法相比，操作步骤更加简化，大大提高了分析方法的灵敏度，并节省了操作时间。因此本发明提供了一种能够简便、快速、灵敏、稳定地检测甲状腺球蛋白抗体的试剂盒，并且使该试剂盒更适用于小中型医院的推广应用。

首先，本发明提供了一种化学发光免疫分析测定甲状腺球蛋白的试剂盒。

根据本发明的试剂盒包括:甲状腺球蛋白抗体校准品；甲状腺球蛋白包被的固相载体；辣根过氧化物酶标记的抗人IgG；化学发光底物液；以及浓缩洗涤液。

根据本发明的试剂盒，其中，所述固相载体为微孔板、塑料珠或塑料管。

根据本发明的试剂盒，所述化学发光底物液包含A液和B液，其中，

所述化学发光底物A液，包括10mM鲁米诺、0.3mM 4-羟基联苯、0.05mM 4-碘苯硼酸、0.2M pH8.7硼酸-硼砂缓冲液，其pH值为8.0～10.0；

所述化学发光底物B液，包括3.5mM过氧化脲、0.1％ Tween20、0.2M pH7.2磷酸盐缓冲液，其pH值为7.0～7.6。

根据本发明的试剂盒，所述浓缩洗涤液包括Na₂HPO₄·12H₂O，87g；NaH₂PO₄·2H₂O，3g；NaCl，240g；Tween-20，1.5mL；Proclin 300，1.5mL；双蒸水，定溶至1000mL；调整pH至7.2～7.4。使用时用双蒸水稀释30倍。